雷公藤多苷导致肝肾损伤的时效关系及作用机制的分析-analysis of the aging relationship and mechanism of tripterygium wilfordii polyglycoside - induced liver and kidney injury.docxVIP

中文摘要雷公藤多苷的临床严重不良反应包括急性肝肾功能损伤。本研究通过给予大鼠临床等效剂量的雷公藤多苷，观察在使用雷公藤多苷后不同时间点，大鼠肝脏和肾脏损伤的情况，并探讨其造成肝肾损伤的作用机制及时效关系。+灌胃给予健康大鼠临床成人等效剂量的雷公藤多苷。将大鼠分为五组，分别连续给药一到五周，每隔一周检测一组大鼠，指标包括：体液免疫和细胞免疫功能，免疫器官重量指数。另外，对雷公藤多苷肝脏毒理作用的检测指标包括：肝功和肝脏病理检查；用免疫组化的方法检测肝脏CD68细胞数；用酶联免疫方法（ELISA）检测肝脏组织（匀浆）中TNF-a的含量；用免疫组化的方法检测大鼠肝组织中凋亡基因Fas的表达；通过流式细胞仪检测大鼠肝细胞的凋亡情况；通过激光共聚焦显微镜检测大鼠肝细胞内钙离子的浓度。对雷公藤多苷肾脏毒理作用的检测指标包括：肾功和肾脏病理检查；通过免疫组化的方法检测肾小管上皮细胞CD40和Fas的表达情况；通过ELISA检测肾脏组织中TNF-a的含量。并对给药三周和五周的实验组大鼠进行恢复期观察，研究雷公藤多苷诱导肝肾损伤的可逆性。统计不同时间的检测结果，分析各个指标的相关性，探索雷公藤多苷对免疫系统的作用与肝肾损伤的相关性。结果发现：1、与空白组比较，雷公藤多苷给药两周后，实验组大鼠的脾脏、胸腺指数均明显下降（p0.05）；雷公藤多苷给药三周后，大鼠体重和肝脏、肾脏指数均下降（p0.05）。2、与空白组相比较，雷公藤多苷给药三周后，大鼠的T淋巴细胞增殖转化能力和B淋巴细胞增殖转化能力均明显下降（p0.01）。3、与空白组比较，雷公藤多苷给药四周后，大鼠血清ALT、AST、BUN、CRE明显升高（p0.05），TP、TBIL降低（p0.05）；肝组织病理学观察可见：从给药三周开始，实验组大鼠的肝小叶失去正常结构，肝细胞索排列紊乱，肝细胞混浊肿胀，有淋巴细胞和中性粒细胞的炎性浸润，肝细胞空泡变性，血栓，脂肪变性以及溶解坏死等现象出现，五周时明显；肾脏从给药三周开始出现细胞点片状坏死，五周时损伤明显。4、与空白组比较，雷公藤多苷给药三周后，大鼠肝脏组织中枯否细胞的活化++标志CD68表达增加（p0.05），给药五周时CD68表达增加明显（p0.01）；给药四周后，肾小管上皮细胞CD40的表达明显增加（p0.05）。雷公藤多苷给药四周后，大鼠肝脏、肾脏组织中TNF-a含量明显增加（p0.05）。5、免疫组化、共聚焦显微镜和流式细胞仪检测结果显示，雷公藤多苷给药四周时，大鼠肝脏、肾脏组织中Fas的表达增加（p0.05），五周时，肝脏、肾脏组织中Fas的表达增加明显（p0.01）；雷公藤多苷给药四周时，大鼠肝脏组织中Ca2+浓度增加（p0.05）；给药五周时，肝脏组织中Ca2+浓度明显增加（p0.01）；与空白组比较，雷公藤多苷给药五周后，大鼠肝细胞凋亡增加（P0.05）。6、给药三周后停止给药观察两周，发现肝、肾组织的病理损伤程度减轻；给药五周后停止给药观察两周，发现大鼠血清ALT、AST、BUN、CRE含量仍明显高于空白组，TP、TBIL含量低于空白组。结论：1、临床成人等效剂量下的雷公藤多苷灌胃后，大鼠体重、脏器指数、细胞免疫和体液免疫功能降低，说明雷公藤多苷作为临床常用的免疫抑制剂，对大鼠的免疫器官和免疫功能都存在抑制作用，且抑制作用随着用药时间的延长而加重；2、形态学和功能学的检测结果表明：临床等效剂量下雷公藤多苷在用药三周开始出现明显的肝肾损伤作用，且损伤程度与用药时间呈正相关，说明雷公藤多苷对肝肾的损伤作用在于直接的细胞毒性；3、雷公藤多苷诱导大鼠肝肾损伤的机制可能为：雷公藤多苷直接造成肝肾细胞坏死，导致巨噬细胞、淋巴细胞等活化，释放超过生理剂量的TNF-a等细胞因子，过量的TNF-a又导致更多的细胞坏死，上调肝肾细胞Fas的表达和增加细胞内Ca2+浓度，诱导肝肾细胞的凋亡。并且，临床成人用量的雷公藤多苷在三周时造成的肝肾损伤可恢复，但继续延长用药时间则可能造成无法恢复的肝肾损伤。关键词：雷公藤多苷肝肾损伤细胞凋亡时效关系ABSTRACTAcutehepaticandnephricinjuryisoneoftheseriousADRsoftripterygiumwilfordiiglucosides(TWG)。After5timesclinicaldoseofTWGisadministratedtorats,hepaticandnephricinjuriesareexaminedandthemechanismandtime-effectrelationshiparediscussed.Ratsweredividedinto5groupsandagroupwasexaminedeveryweek.Theimmuneindexesincl