利用rnai技术敲除拟南芥atcdpk1和atcdpk1a基因的研究-study on knocking out atc dpk1 and atc dpk1 a genes in arabidopsis thaliana by rnai technology.docxVIP

而且RNAi技术相比基因敲除技术也更快更简单[8);3、可传递性:RNAi抑制基因表达的效应不仅可在生物体内的不同细胞间传递和维持，甚至可以通过繁殖边传下一代;4、ATP依赖性:siRNA的形成以及RISC的激活都需要ATP的参与;5、具有放大的作用。如马铃薯中发现的RNA依赖RNA聚合酶(RNA-directedRNApolymerase，RdRP)可能与RNAi信号的扩增有关。在拟南芥中也发现与RdRP相似功能的蛋白。1.1.4RNAi的应用从最早发现RNAi现象到(Science)}杂志将其评选为2002年的重大突破，再至IJ2006年的诺贝尔医学奖，一项全新的技术在这几年中的飞速发展以及关注程度是绝无仅有的，这些足以说明RNAi在未来具有极大地应用前景。(l)基因功能的研究:随着拟南芬、水稻以及人类等许多生物基因组测序工作的完成，对各基因功能的研究成为研究重点，而合适的方法及工具是研究速度及准确性的保蹄，首先将RNAi技术在拟商芥中沉默基囚的是Meyerowitz等人间，DaisukeMiki寄:也已经证明RNA干扰机制在水稻中具有很高的保守性，而dsRNA介导的RNA干扰在分析水酒及其它植物高度保守的多基因家族中是十分有力的工具[10)。在牵牛花、大豆中都成功的利用RNAi技术对目的基因的功能进行了研究。;最近研究发现，利用RNAi技术可以进行多基因筛选，以及描述出基因之间的相互关系，这样有助于人们了解细胞系统的工作[11)。(2)植物育种及改良优化:利用RNAi研究雄性不育系及其恢复系在育种上具有重大意义，Meilan等在白杨中发现了和拟南芥同源的花发育基因，并获得了可稳定边传的雄性不育白杨突变体[12.13)。通过RNAi技术还可以改良植物的抗性，、营养成分等，例如PintoYM等人培育出的具有RYMV抗性的水稻[1付;Kusabs等生产出能降低麦谷蛋白表达水平的稻米种类LGC-1，给不能消化麦谷蛋白的肾脏病人带来福音(J5)。(3)RNAi药物的研制开发:在研究甜症、艾滋病、心血管及遗传病的治疗过程中，人们希望通过RNAi技术提供基因治疗的新方法，新思路，但是由于目前对于RNAi调控机制并非完全了解，人类自身系统的复杂性等原因，真正的RNAi药物并未大面积应用，但已有的研究发现，通过RNAi的确对某些疾病具有很好的治疗效果。1.2植物中的钙离子钙离子是植物体内普遍存在的第二信使，其参与植物许多重要的生理过程，如根瘤形成、气孔开闭、光敏色索光信号传导、向地性和l花粉管极性生长寄dl)。钙离子通过改变在细胞质中的浓度，从而使外界信息通过钙结合蛋白来调节生理生化反应。而外界信息影响胞内钙离子浓度变化的途径是改变膜的通透性或通过调节钙离子通道的开闭。这些钙通道的开关又受到膜势及其蛋白质磷酸化的调控。在受到如光、植物激素、机械剌激、非生物逆搅及病原激发子等外界剌激信号时都司能引起胞内Ca2+水平的变化[16-18)。目前研究已知，钙与细胞分裂索、生长索、GA、ABA以及乙烯都有一定的关系[19-21);Lynch等[22)采用Ca2+荧光探针lndo-l证实，在玉米原生质体!血质中盐胁迫可诱导Ca2+7.)平的提高，并持续几分钟，这与高温胁迫相似;Friedman寄:在研究短日照诱导矮牵牛开花时，发现钙对开花诱导是必不可少的[23);触摸和冷撒在15s内引起植物细胞质Ca2+水平一个尖峰;缺氧诱导胞质Ca2+7.)平的提高达几小时[2410植物中钙信号传感器分为三类，一、钙调蛋白(包括钙调索类蛋白)，钙调蛋白是几乎存在于所有其核细胞中的钙结合蛋白，它能够敏锐的捕获任何微量的钙信号，也只有和钙离子结合后才有活性。据一些研究可知，钙调蛋白参与很多生化反应，涉及其中关键性的酶，如控制信息传递中，第二信使cAMP合成的腺背酸环化酶与分解的磷酸二醋酶:与蛋白质磷酸化及去磷酸化有关的蛋白激酶和l蛋白磷酸解酶:二、钙依赖蛋白激酶，相比而言CDPK是植物中研究最多的蛋白激酶，本文就是对拟商i芥CDPK1及CDPK1a进行的基础IJ工作;三、钙调磷酸酶B类蛋白，是动物与植物中钙调磷酸酶的B调控区同源的一类新的植物特殊钙离子受体家族，钙调磷酸酶在动物中作为钙离子信号途径的最初感受因子已经被证实。CBL在植物中的作用还简要进一步证明，在拟南芥中发现与酵哥钙调磷酸酶B亚单位同源的蛋白白SOS3基因所编码，SOS3可能是盐、水胁迫信号传导途径中钙离子的最初感受困子[25、26)。以上三类蛋白的共同特点是都具有EF-手相结构域。1-3蛋白激酶的分类现今，已经从拟商芥、烟草、小麦、玉米、水稻、黑麦、燕麦、豌豆、大豆、茵宿、菠菜、苹果、十字花科植物中都发现了蛋白激酶或其基因。根据其底物蛋白被磷酸化的氨基酸残基利类，司将它们分为3类:(1)丝氨酸/苏氨酸