霍乱毒素基因_ctx_和耐热直接溶血素基因_省略__双重TaqMan实时PCR检.pdfVIP

·3730 · 现代预防医学 年第 卷第 期 ， ， ， 2011 38 18 Modern Preventive Medicine 2011 Vol.38 NO.18 文章编号： 1003-8507 （2011 ）18-3730-03 中图分类号： 16.5 文献标识码： A 【实验技术及其应用】 霍乱毒素基因（ctx）和耐热直接溶血素基因（tdh）双重 TaqMan 实时PCR 检测方法的建立 1 1 2 1 3 4 韩辉 ， 李海山 ， 胡群 ， 姚李四 ， 谭绪良 ， 贾琳 摘要： ［ 目的］ 建立霍乱毒素和耐热直接溶血素基因双重TaqMan 实时-PCR 实验室检测方法。 ［ 方法 ］ 根据霍 乱毒素基因 （Cholera toxin gene ， ctx ） 和耐热直接溶血素基因 （thermostable direct hemolysin ， tdh ） 的保守序列设计引物 和TaqMan 探针， 建立检测霍乱毒素和耐热直接溶血素两种毒力基因的双重TaqMan 实时PCR 方法。 对所建立的霍乱毒 素基因和耐热直接溶血素基因双重TaqMan 实时PCR 检测方法进行灵敏度和特异度评价。 ［ 结果 ］ 建立了霍乱毒素基 因和耐热直接溶血素基因双重 实时 的实验室检测方法。 优化的 和 双重 实时 反应体系 TaqMan PCR tdh ct TaqMan PCR 中， ct 引物和探针的浓度分别为200 nmol／ L 和 100 nmol／ L ； tdh 引物和探针的浓度分别为200 nmol／ L 和 100 nmol／ L 。 反 应体系的灵敏度和特异度均为 。 优化的反应体系对两种质粒模板的检测下限均为 2 拷贝 ， 扩增效率分别 100％ 1.0×10 ／ μl 为 和 。 ［ 结论 ］ 本研究建立了基于 探针的 和 双重实时 检测方法， 具有令人满意的灵敏 94％ 97.7％ TaqMan tdh ct PCR 度和特异度。 检测下限能达到 2 拷贝 ， 高于普通 倍。 并且双重实时 能够在一个反应体系中同时