kazrin f促进宫颈癌细胞恶性行为的研究-study on kaz rin f promoting malignant behavior of cervical cancer cells.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 保密，在 保密 ，在 五 年解密后适用本授权书。 不保密 √ 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津医科大学硕士学位论文 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的 Kazrin 蛋白最早于 2004 年由 Karen R. Groot 及其同事发现，他们发现了它 的四个异构体 kazrin A，kazrin B，kazrin C，kazrin D（kazrin C 和 kazrin D 的氨 基酸序列相同），并证明它与细胞连接相关。之后，陆续有关于 kazrin 的研究， 发现它与小鼠和非洲爪蟾蜍的胚胎发育相关。2009 年，Rachida Nachat 发现了 kazrin 的另一个异构体 kazrinE，并证明其与微管连接，与桥粒形成和表皮分化 相关。同年，本实验室发现了另一个新的异构体 kazrin F，具有抗细胞凋亡作用。 本课题拟在实验室前期工作的基础上，研究 kazrin F 对宫颈癌（cervical cancer） 细胞某些恶性行为的影响，并阐明机制。宫颈癌在世界范围内是女性发病率和 死亡率较高的一类癌症，尤其在发展中国家。通过本篇研究，我们试图将 kazrin F 作为宫颈癌诊断和治疗的一个新的靶标。 方法 首先应用 qRT-PCR 检测宫颈癌组织和癌旁正常宫颈组织中 kazrin F 的表达 水平，初步预测 kazrin F 对肿瘤发生的可能作用。之后我们在宫颈癌细胞 HeLa 中过表达或敲降 kazrin F，运用 MTT 实验，平板克隆形成实验，transwell 迁移 和侵袭实验，检测 kazrin F 对宫颈癌细胞生长、增殖能力、迁移能力和侵袭能力 的影响。之后我们用流式细胞术（FACS）检测了 kazrin F 对宫颈癌细胞凋亡和 细胞周期进程的影响，以阐明 kazrin F 影响细胞生长和增殖能力的机制。Western blot 检测 kazrin F 对宫颈癌细胞上皮间质转化的影响，阐明 kazrin F 影响细胞迁 移和侵袭能力的机制。最后，我们用荧光显微观察和 western blot 实验检测了 kazrin F 对宫颈癌细胞自噬水平的影响。 结果 qRT-PCR 检测发现宫颈癌组织相对于癌旁正常组织 kazrin F 高表达。验证 kazrin F 过表达及敲降质粒有效后，MTT 检测发现 kazrin F 能增强宫颈癌细胞活 性；平板克隆形成实验证明 kazrin F 能促进宫颈癌细胞生长增殖能力；transwell 迁移实验和侵袭实验证实 kazrin F 能促进宫颈癌细胞迁移和侵袭能力。流式细胞 术检测发现 kazrin F 能抑制宫颈癌细胞中紫杉醇诱导的凋亡，促进宫颈癌细胞周 I 期进程。Western blot 分别检测上皮标记物和间充质标记物，发现 kazrin F 能促 进宫颈癌细胞上皮间质转化。最后，荧光显微观察和 western blot 检测分别证实 kazrin F 能提高宫颈癌细胞外源性和内源性 LC3-II 水平，促进宫颈癌细胞自噬。 结论 以上实验结果证明 kazrin F 通过调节细胞周期进程、细胞凋亡、EMT 和自 噬促进宫颈癌细胞生长、增殖、迁移和侵袭，在宫颈癌细胞中发挥促癌作用。 它可能作为一种新的生物标记物对宫颈癌的诊断和治疗具有潜在应用价值。 关键词：kazrin F 宫颈癌细胞 生长 增殖 迁移 侵袭 自噬 II Abstract Objective Kazrin protein was first found in 2004 by Karen R. Groot and his colleagues. They had found four isomers of kazrin A, kazrin B, kazrin C, kazrin D (amino acid sequences of kazrin C and kazrin D are same)