kca3.1在肝癌细胞增殖 细胞周期 凋亡和血管新生中的调控机制的研究-regulatory mechanism of kca 3.1 in proliferation cell cycle apoptosis and angiogenesis of hepatocellular carcinoma cells.docx

华中科 技大学 博士 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 1万方数据 1 万方数据 英文缩略词 英文缩写 英文全称 中文全称 KCa3.1 Intermediate conductance calcium- activated potassium channel 中电导钙离子激活钾离子 通道 KCa Calcium-activated potassium channel 钙激活钾离子通道 HCC Hepatocellular carcinoma 肝细胞肝癌 MAPK Mitogen- activated protein kinase 促分裂原激活蛋白激酶 SDS Sodium lauryl sulfate 十二烷硫酸钠 AP Ammonium persulfate 过硫酸铵 PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 TEMED Tetramethylethylenediamine 四乙基亚乙胺 PMSF Phenylmethyl sulfonylfluoride 氟化苯甲基磺酰 TBS Tris buffered saline Tris 缓冲液 TBST Tris buffered saline with Tween 含 Tween 的 Tris 缓冲液 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 TRAM-34 Tetraethylammonium-34 四乙铵-34 KCa3.1 在肝癌细胞增殖、细胞周期、凋亡和血管新生中的调控 机制的研究 前 言 原发性肝细胞癌是我国及世界范围内最常见的原发性肝脏恶性肿瘤疾病。我国原 发性肝细胞癌的发病率高于西方国家，并且在恶性肿瘤发病率中列第二位。目前原发 性肝细胞癌的治疗手段以手术切除、介入治疗、化学药物治疗及靶向药物治疗为主。 然而因其高转移及复发率，目前原发性肝细胞癌的治疗效果尚不理想。一些靶向治疗 药物如索拉菲尼等已在临床使用，然而其效果有限。因此进一步研究原发性肝细胞癌 发生、发展过程中的分子机制，探索更多可能应用的靶点，成为迫在眉睫的研究任务。 肿瘤的发生及发展与肿瘤细胞的增殖密不可分。既往研究发现，离子通道对维持 细胞生理平衡和稳定起到极其关键的作用。离子通道作为胞内外离子的调控关键，直 接或间接参与细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的调控过程中。许多研究提示，肿瘤细 胞中离子通道往往出现表达异常，可能由此途径对肿瘤细胞的细胞膜电位、胞内离子 浓度、细胞体积及胞内微环境等进行精细调控，进而影响肿瘤细胞的增殖。而细胞表 面离子通道表达的变化，可能也参与肿瘤细胞的侵袭、转移及肿瘤血管生成。陆续的 研究发现多种钾离子通道的表达改变与肿瘤相关过程有关，包括电压依赖型、内向整 流型、ATP 型、膨胀激活型及钙离子激活型等。 中 电 导 钙 离 子 激 动 钾 离 子 通 道 （ intermediate- conductance calcium-activated potassium channel，KCa3.1）为钙离子激动钾离子通道家族中的一种亚型，最初在上 皮和内皮结构丰富的组织中被识别，包括结肠、肺脏、肾脏、前列腺、胎盘和唾液 腺，也在免疫系统中如胸腺、脾脏、淋巴细胞及骨髓中表达。KCa3.1 是一种六次跨 膜蛋白，N 端与 C 端均位于胞内，其离子区位于 S5-S6 之间。C 端末尾具有钙调蛋白 结合位点，其 C 端 14 号氨基酸残基是其激活的调控位点。KCa3.1 通道由 KCNN4 基 因表达，具有 3 种嵌合变异体（KCNN4a,425 氨基酸残基；KCNN4b，424 氨基酸残 基；KCNN4c，395 氨基酸残基），其定位的结构域有所不同。 PAGE 10万方数据 PAGE 10 万方数据 已有较多研究证实 KCa3.1 在多种人类恶性肿瘤细胞中呈异常表达。如前列腺癌、 子宫内膜癌、乳腺癌及胰腺癌等组织中，均发现高表达的 KCa3.1 通道蛋白及其上游 KCNN4 mRNA。同时，使用 KCa3.1 抑制剂及 siRNA 干扰，可抑制体外培养的肿瘤 细胞的增殖和分化。因此我们推测，KCa3.1 在维持细胞生理功能、调节胞内钙离子 浓度以及中介调节信号通路的过程中发挥了极其重要的作用。 本课题拟围绕 KCa3.1 通道研究其在原发性肝细胞癌细胞增殖、细胞周期、细胞 凋亡过程中的作用及调控机制，阐明 KCa3.1 在原发性肝细胞癌肿瘤血管生成中的作 用和机制，以期深入探索离子通道在原发性肝细胞癌发生、发展中的作用机制，并在 其作为新的治疗靶点的可行性上做出初步的探索和实践。 中文摘要 第一部分 KCa3.1 在原发性肝癌中的表达及意义 目的：证明 KCa3.1 通道