kiss1hot7t175基因在不同转移习性的人鼻咽癌细胞株中的表达探讨-expression of kiss 1 hot7t175 gene in human nasopharyngeal carcinoma cell lines with different metastasis habits.docxVIP

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2018-05-28 发布于上海
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kiss1hot7t175基因在不同转移习性的人鼻咽癌细胞株中的表达探讨-expression of kiss 1 hot7t175 gene in human nasopharyngeal carcinoma cell lines with different metastasis habits

A、英文缩略词表······················································································38B、综述······································································································39Kiss-1/hOT7T175基因在不同转移习性的人鼻咽癌细胞株中的表达探讨中文摘要目的：Kiss-1/hOT7T175基因是新近发现的一对与肿瘤转移抑制相关的基因，其表达的多种调控机制与肿瘤侵袭和转移有关，并已在多种恶性肿瘤中得到证实。目前，其在鼻咽癌中的研究还鲜见文献报道。本实验检测Kiss-1/hOT7T175基因在不同转移习性的人鼻咽癌细胞株CNE-1(高分化鳞癌)、CNE-2Z(低分化鳞癌)、SUNE-1(低分化鳞癌癌细胞系)、SUNE-1-5-8F(高成瘤，高转移)、SUNE-1-6-10B(成瘤，低转移)中的蛋白和mRNA水平的表达情况，以探讨该对基因在鼻咽癌转移中的作用，并为课题组下一步实验提供细胞理论基础。方法：分别应用逆转录酶聚合酶链式反应(reverstranscriptase-polymerasechainreaction,RT-PCR)，免疫组织化学法在mRNA和蛋白水平检测不同转移习性的人鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2Z、SUNE-1、SUNE-1-5-8F、SUNE-1-6-10B中Kiss-1和hOT7T175的表达：(1)体外培养的各细胞株生长到细胞密度为5×104个/ml时，收集细胞，用Trizol法提取细胞RNA，应用RT-PCR检测CNE-1、CNE-2Z、SUNE-1、SUNE-1-5-8F、SUNE-1-6-10B中Kiss-1mRNA和hOT7T175mRNA的表达，实验重复4次；(2)将各细胞株以5×104/ml的细胞密度接种在已铺有无菌盖玻片的6孔板内，37oC，5%CO2生长48小时后取出盖玻片，在室温下按照免疫组织化学试剂盒的步骤进行操作，用免疫组织化学法检测各细胞株中Kiss-1蛋白和hOT7T175蛋白的表达。结果：1.不同转移习性的人鼻咽癌细胞株均表达Kiss-1蛋白和hOT7T175蛋白，且Kiss-1蛋白和hOT7T175蛋白在表达水平上具有正相关性(p0.05，r=0.958)。2.不同转移习性的人鼻咽癌细胞株均扩增出Kiss-1mRNA，而hOT7T175mRNA在高转移性细胞株SUNE-1-5-8F中未扩增出。且Kiss-1和hOT7T175基因在mRNA表达水平上具有正相关性(p0.05，r=0.923)。3.在低转移性细胞株SUNE-1-6-10B中Kiss-1和hOT7T175基因在蛋白水平和mRNA水平的表达都显著高于其他具有较高转移习性细胞株中的表达(P0.01)。结论：1)Kiss-1和hOT7T175基因在蛋白水平和mRNA水平的表达具有一致性，随着Kiss-1表达的增高，hOT7T175表达也呈增高趋势。2)Kiss-1和hOT7T175基因在低转移性细胞中高表达，而在高转移性细胞中低表达，提示了Kiss-1/hOT7T175可能在鼻咽癌肿瘤细胞转移机制中发挥重要的抑制作用。[关键词]:鼻咽肿瘤；转移抑制基因；Kiss-1/hOT7T175；逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)；免疫组织化学法TheExpressionofKiss-1/hOT7T175inhumanNasopharyngealCellLineswithdifferentmetastasisabilityAbstractObjective:Kiss-1/hOT7T175genesarenewmetastasissuppressorgenes.Theirmechanismsaboutinvasionandmetastasisoftumorcellshavebeenconfirmedinavarietyoftumors.Currently,thecorrelationbetweenKiss-1/hOT7T175genesandnasopharyngealcarcinoma(NPC)hasnotbeenreportedinandout.Toexploretheroleofthispairofgenesinnasopharyngealcarcinomametastasis,weassessedtheexpressionofKiss-1/hOT7T175genesinhumannasopharyngealcelllines(CNE-1、CNE-2Z、SUNE-1、SUNE-1-5-8