klf4促进富集结肠癌干细胞的球细胞发生emt的实验研究-experimental study on kl f4 promoting the development of emt in colon cancer stem cells enriched in spherical cells.docxVIP

前言结直肠癌及乳腺癌等机体的各种常见的恶性肿瘤是危害人体健康的一大“杀 手”之一[1]。随着医疗技术及药物的开发，如各种手术技术的改善、微创手术的 发展、化疗、放疗、介入治疗等针对肿瘤细胞群的综合治疗方案，各种恶性肿瘤 的治疗疗效都得到了一定的改善，但是肿瘤的转移、复发还是得不到改善，整体 疗效还是有待改进[2]。众多国内外研究在多种肿瘤中发现了肿瘤干细胞（Cancer stem cells, CSCs）的存在，CSCs 可通过细胞的自我更新和无限增殖来维持肿瘤 细胞群的生长，是肿瘤快速生长、转移、复发。耐药的重要因素[3-4]。CSCs 处于 相对休眠状态而对药物的反应相对不敏感，从而产生耐药状态。因此，原则上， 在临床治疗时，只有策底消灭了肿瘤中的 CSCs，肿瘤才有可能策底治愈。目前 的研究[5-8]，在结直肠癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、白血病、肝癌、胰腺癌等 多种肿瘤中均发现了 CSCs 的存在，而且进行了大量的细胞研究，证实了其干细 胞特性。上皮细胞-间质转化（Epithelial-mesenchymal transition, EMT），是指上皮细胞 通过特异的生物学机制致上皮表型消失而转化为具有间质表型的细胞的生物学 过[9]。肿瘤上皮细胞发生 EMT 后，上皮细胞失去了细胞极性，同时与基底膜的 连接有关的上皮表型消失，从而获得较强的侵袭与迁移能力、抗凋亡等间质表型。 有研究表明[10]，EMT 是上皮细胞源性恶性肿瘤细胞获得较强侵袭及迁移能力等 恶性行为的重要生物学过程。实验研究表明[11]，肿瘤上皮细胞发生 EMT 后细胞 也伴随着 CSCs 特异性表型的表达，这意味着 EMT 的发展过程与 CSCs 具有重 要的联系。Jnk1 是 JNK 信号转导通路中重要的介质，它在细胞周期、细胞增殖、凋亡 等生理病理过程中发挥重要的作用。同时，JNK 也参与 WNT 信号通路介导 EMT 的发生[12]。有研究表明[13-15]，核转录因子 KLF-4 参与调节正常细胞的增殖、分化、凋亡 等过程。目前国内外研究认为，KLF-4 在维持干细胞的自我更新及分化中发挥重 要作用[16-18]。而正常干细胞和肿瘤干细胞在在生物行为等方面具有相似性，但是KLF-4 与 CSC 及 EMT 三者之间的关系的研究尚少，因此本研究具有重要的意义。本课题借助无血清干细胞培养基获取富集结肠癌干细胞的球细胞，首先检测 富集干细胞的细胞球中 KLF-4 的表达，在通过 RNA 干扰技术沉默球细胞中的 KLF4，以明确 KLF4 对球细胞的自我更新能力、恶性行为特征、细胞球中干细 胞比例及 EMT 指标的影响。从而论证，KLF4 在肿瘤干细胞中的作用，特别是 对结肠癌肿瘤干细胞发生 EMT 的作用。参考文献[1]李明, 顾晋. 中国结直肠癌 20 年来发病模式的变化趋势[J]. 中华胃肠外科杂 志, 2004, 7(3): 214-217.[2]Edwards B K, Ward E, Kohler B A, et al. Annual report to the nation on the status of cancer, 1975-2006, featuring colorectal cancer trends and impact of interventions (risk factors, screening, and treatment) to reduce future rates[J]. Cancer, 2010, 116(3): 544-573.[3] Jemal A, Bray F, Center M M, et al. Global cancer statistics[J]. CA: a cancer journal for clinicians, 2011, 61(2): 69-90.[4] Siegel R, Naishadham D, Jemal A. Cancer statistics, 2012[J]. CA: a cancer journal for clinicians, 2012, 62(1): 10-29.[5] Clevers H. The cancer stem cell: premises, promises and challenges[J]. Nature medicine, 2011: 313-319.[6]Merlos-Suárez A, Barriga F M, Jung P, et al. The intestinal stem cell signature identifies colorectal cancer stem cells and predicts disease rel