licl对不同基因型小鼠前脂肪细胞成脂分化中chemerin表达影响-effect of licl on chemir in adipogenic differentiation of preadipocyte in mice with different genotypes.docxVIP

目录摘要 IABSTRACT III第一章 文献综述 11 前脂肪细胞 12 Wnt/β-catenin 信号通路与成脂分化5Chemerin 信号与成脂分化7Wnt/β-catenin 信号通路、Chemerin/CMKLR1 信号通路及 TNF-α95 论文研究的目的及意义 10第二章 小鼠原代前脂肪细胞成脂分化中四个时期的确定 11 1 实验材料与试剂 112 实验仪器 143 实验步骤 144 实验结果 165 实验结果分析与讨论 18第三章 LiCl 干预不同基因型小鼠前脂肪细胞分化过程的形态学观察191 实验材料与试剂 192 实验仪器 213 实验步骤 224 实验结果 265 实验结果分析与讨论 31第四章 LiCl 对不同基因型小鼠前脂肪细胞分化过程中 Chemerin 及成脂相关分子基因表达 的影响321 实验材料与试剂 322 实验仪器 333 实验步骤 334 实验结果 375 实验结果分析与讨论 44第五章 LiCl 对不同基因型小鼠前脂肪细胞分化过程中 Chemerin 及成脂相关蛋白表达的影I响 471 实验材料与试剂 472 实验仪器 503 实验步骤 514 实验结果 545 实验结果分析与讨论 59总结 61参考文献 64攻读硕士学位期间发表的学术论文 69致谢 70II摘要目前，越来越多的人患有肥胖症，其可引发多种并发症，如冠心病、动脉粥样硬化、 糖尿病、高血压、高血脂及肿瘤等疾病，严重威胁着人类健康。因此，研究肥胖的发生机 制和防治措施已成为 21 世纪生命科学和医学研究的迫切任务。白色脂肪组织的过度积累引发肥胖，而脂肪细胞的分化在肥胖发生过程中扮演了重要 角色，涉及复杂的网络分子调控。Wnt/β-catenin 信号通路、chemerin/CMKLR1 信号通路 及 TNF-α 均参与脂肪细胞分化的调控过程。其中，Wnt/β-catenin 信号通路通过下调 C/EBPs 和 PPARγ 的表达水平，抑制成脂分化。Chemerin 作为新近发现的脂肪因子，通过自分泌 和旁分泌的方式调节脂肪细胞分化。有研究表明，分别抑制 chemerin 及其受体 CMKLR1 的表达后，可使脂肪细胞的分化过程明显受阻；同时，chemerin 可降低 GSK-3β的磷酸化 水平，激活 GSK-3β，而后者是影响 Wnt/β-catenin 信号通路中 β-catenin 是否降解的关键 因子。由此推测，Wnt/β-catenin 信号通路与 chemerin 信号分子在调控成脂分化过程中存 在串话。然而，其串话机制还未明确，尤其在脂肪细胞分化过程中，激活 Wnt/β-catenin 信号通路对 chemerin 的表达有何影响？其影响机制是什么？目前未见研究报道。另外， TNF-α 作为一种炎症因子，也通过多种机制抑制成脂分化，而它与 Wnt/β-catenin 及 chemerin/CMKLR1 信号通路之间的关系还不清楚。本实验以 WT 小鼠、TNF-α-/-小鼠、Leprdb/db 小鼠及 DT 小鼠为实验材料，使用 Wnt/β-catenin 信号通路的激活剂 LiCl，干预四种基因型小鼠前脂肪细胞的分化过程，建立 Wnt/ β-catenin 信号通路激活模型，通过实时荧光定量 PCR 和免疫印迹技术，检测成脂分化中 chemerin 及成脂相关因子的表达变化，并分析 TNF-α 缺失情况下，对 LiCl 引起 chemerin 表达变化的影响。实验结果如下：1. 诱导 WT 小鼠前脂肪细胞分化，确定成脂分化过程中四个关键时期，即未诱导时期（诱导前）、诱导早期（诱导 3 天后）、诱导中期（诱导 7 天后）及诱导晚期（诱导 14 天 后）。2. 形态学观察发现，20 mM LiCl 显著抑制四种基因型小鼠前脂肪细胞的分化，且抑 制效果无明显差异。另外，TNF-α-/-小鼠脂肪细胞的成脂诱导率最高，约 80%，WT 小鼠次 之，DT 小鼠再次之，Leprdb/db 小鼠最低，约 40%。3. 实时荧光定量 PCR 结果表明，使用 LiCl 干预四种基因型小鼠前脂肪细胞分化过程 中，与非干预组相比，成脂相关因子 C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ2 及 adiponectin 的基因表 达水平均下调，Wnt/β-catenin 信号通路关键分子β-catenin 的基因表达水平上调，而Ichemerin 的基因表达水平于分化早期下调，分化中期和晚期均上调。另外，TNF-α 缺失可上调成脂分化早期 chemerin 基因的表达，并且对 LiCl 通过正反馈调节机制引起的 chemerin基因表达的上调