补阳壮骨方对雌性切除卵巢大鼠骨密度及骨小梁形态影响.docVIP

补阳壮骨方对雌性切除卵巢大鼠骨密度及骨小梁形态影响 　　【摘要】 目的:研究中药复方补阳壮骨提取物对雌性造模大鼠（切除双侧卵巢）骨密度及骨小梁的影响。方法:手术切除雌性SD大鼠双侧卵巢造模，手术后1个月开始给药，连续灌胃补阳壮骨提取物4个月；采用DEXA法测定大鼠全身骨密度、腰椎骨密度、双侧股骨颈骨密度以及双侧股骨骨密度；取第2-4腰椎切片、HE染色后观察测定骨小梁形态。结果:在影响各部位骨密度方面，补阳壮骨方高、中、低剂量组均高于模型组，其中中剂量组腰椎骨密度与模型组相比有显著差异（P 　　【关键词】 补阳壮骨方;骨密度;骨小梁 ? 　　【中国分类号】 R231.3【文献标识码】 A【文章编号】 1044-5511（2012）02-0091-02?? 　　 补阳壮骨方主要由淫羊藿、黄芪、补骨脂等中药组成，临床主要用于预防及治疗肾阳虚引起的骨质疏松。在前期研究中表明［1］，补阳壮骨方可一定程度上防止自然衰老引起的骨密度下降；能改善自然衰老引起的骨小梁结构退化，实验表明该方对于更年期的骨质疏松症具有一定功效。但是该方的作用机理有待深入发掘。关于中药复方的机理复杂，一般具有间接和直接作用于靶细胞的作用。Hong Zhang［2］等发现中药复方二至丸对成骨细胞和破骨细胞直接作用；Nian H［3］等研究发现，二仙汤提高卵巢切除大鼠的血浆雌二醇浓度，降低血浆中的ALP水平，增加卵巢的重量等。对鉴于该方的作用机理尚未明确，需要进一步探索性研究。因此，本实验针对补阳壮骨方的功能主治，研究其对雌性切除卵巢大鼠骨密度及骨小梁的影响，为阐明其作用机理提高依据。现将结果报道如下。? 　　1 试验材料 ? 　　1.1药物 :补阳壮骨方提取物：广州中医药大学新药开发研究中心提供，批提取物1g约相当于原生药3.9g，阴凉干燥条件下密闭保存。右归丸：河南省宛西制药股份有限公司生产，批号071004。? 　　1.2动物 :SD大鼠，雌性，SPF级，由广东省实验动物中心提供，合格证：SCXK（粤）2003-0001。? 　　1.3仪器:骨密度测量仪：美国GE公司生产，型号Lunar Prodigy；全自动石蜡切片机:德国徕卡公司生产,型号KM2255；全自动生物组织脱水机：德国徕卡公司生产,型号TP1020；石蜡包埋机：德国徕卡公司生产,型号EG1140；全自动染色机：德国徕卡公司生产,型号5010；生物显微镜：日本奥林巴斯生产，型号BX50；漂烘片机：中国雅博公司，型号YABO200；医学图象分析管理系统：中国北航公司生产，型号：MIAS? 　　2 试验方法? 　　2.1 动物来源及分组? 　　(1)动物来源 :正常SD大鼠，雌性，体重180±20g，SPF级，由广州中医药大学实验动物中心提供，合格证：0031701。 ? 　　(2)动物分组:取正常SD大鼠80只，经适应性喂养后造模，造模一周后按体重随机分为空白组、模型组、阳性组、补阳壮骨方高、中、低剂量组。? 　　2.2造模方法:除空白组外，各组均施行经腹部双侧卵巢切除手术，空白组施行假手术。? 　　2.3 给药剂量的确定:根据补阳壮骨方服用剂量和预试验结果确定，本试验中补阳壮骨方提取物的低、中、高三个剂量组(按体重计算)分别相当于成人临床用量的5、10、20倍，按生药计算剂量分别为0.55、1.1、2.2g生药/kg，按提取物计算剂量分别为141，282，564mg提取物/kg，（用于药效试验的产品为批中试产品，未压片，尚有部分辅料未添加）分别加蒸馏水配成0.055、0.11、0.22g生药/mL，相当于14.1、28.2、56.4mg提取物/mL的混悬液，超声分散，使用前摇匀。倍美力片按相当于成人临床用量的10倍计算，剂量为104.2μg/kg/d，加蒸馏水配成10.42μg/mL的混悬液，超声分散，使用前摇匀。? 　　2.4 给药方法: 灌胃给药，1mL/100g体重，每日1次，空白组和模型组给予等体积蒸馏水，其余各组给予相应供试品。切卵巢模型术后恢复1.5个月后开始给药，连续给药4个月，末次给药后动物禁食12h。? 　　2.5 检测指标? 　　(1) 骨密度（BMD）测定：麻醉后采用DEXA法测定大鼠全身骨密度、腰椎骨密度、双侧股骨颈骨密度以及双侧股骨骨密度。? 　　(2) 骨小梁面积、骨小梁面积率的测定及骨小梁计数：取2-4腰椎，10%甲醛固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，用图像分析软件测定骨小梁面积及骨小梁面积率；每片随机观察椎体三个视野（放大10倍），计算视野内骨小梁个数，取平均值。? 　　 3 试验结果? 　　表1-1 补阳壮骨方提取物对切除双侧卵巢模型大鼠骨密度（BMD）的影响（x?-±s） 单位：g/cm