丹参药材中丹参酮ⅡA和丹酚酸B不同提取方法探讨.docVIP

丹参药材中丹参酮ⅡA和丹酚酸B不同提取方法探讨 　　摘要：目的：研究丹参药材不同提取工艺的丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量高低。方法：采用HPLC法，比较了两种不同提取方法的丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量高低。 结果：提取方法丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量明显高于药典方法。结论：该提取方法节省溶剂，重现性好。 　　关键词：丹参酮ⅡA;丹酚酸B；HPLC 　　中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2008)04-0873-03 　　 　　丹参为唇形科植物(Salvia Miltiorrhiza Bge)的干燥根及根茎[1],具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦之功。临床上用于治疗心绞痛、冠心病等心血管疾病。丹参主要含有脂溶性和水溶性两类成分[2]。脂溶性成分主要是丹参酮类,而水溶性成分主要是酚酸类,如丹参素、原儿茶醛等。2005版《药典》一部复方丹参片下丹参的提取采用95％乙醇加热回流1.5h药渣再用50％乙醇回流1.5h。笔者通过研究发现丹参提取采用70％乙醇10、8、6倍量分别回流2、1、1h，通过HPLC测定丹参酮ⅡA含量明显高于药典方法。而且该方法节省溶剂、重现性好、操作简便。故本文就其含量测定方面的研究工作做一简要介绍。具体如下。 　　 　　1仪器和试药 　　 　　1.1仪器 　　Waters515双泵，2487双波长紫外检测器，WDL-95色谱工作站（大连化学物理研究所生产）。 　　 　　1.2试药 　　甲醇为色谱纯(江苏汉邦科技有限公司),乙腈色谱纯（德国Merck公司），水为超纯水,其他试剂均为分析纯。丹参药材购于南京市药材公司,经南京中医药大学鉴定教研室吴启南教授鉴定，符合《中华人民共和国药典》(2005版)有关规定。 　　 　　1.3对照品 　　丹参酮ⅡA对照品(中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用,批号:110766-200416)。丹酚酸B（中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：111562-200302）。 　　 　　2实验方法与结果 　　 　　2.1丹参酮ⅡA含量测定方法 　　2.1.1色谱条件[3-6] 色谱柱：Lichrospher C18 (4.6mm×250mm);流动相:甲醇∶水(70∶30);流速:1.0mL/min;检测波长:270nm;柱温:30℃;AUFS=0.1。 　　2.1.2对照品溶液的制备精密称取丹参酮ⅡA 5.46mg,置于25mL量瓶内,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。然后精密吸取1mL置于5mL量瓶内,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为43.68μg/mL淫羊藿苷对照品溶液（色谱图如图1所示）。 　　 　　2.1.3标准曲线的制备分别精密吸取上述0.2184mg/mL的丹参酮ⅡA对照品2、4、6、8、10mL于25mL量瓶加甲醇稀释至刻度摇匀，得到浓度分别为17.472、34.944、52.416、 69.888、87.36μg/mL。分别吸取上述对照品溶液各5μL，注入液相色谱器仪中,测定色谱峰面积,以进样量X为横坐标,色谱峰面积Y为纵坐标,绘制标准曲线,经线性回归,回归方程为Y=1386532X-1832,r=0.9996,由测定结果显示,丹参酮ⅡA进样量在0.08736～0.4368μg范围内线性关系良好。 　　2.1.4供试品溶液的制备称取丹参药材8份各20g，分别按两种不同提取工艺(70％乙醇10、8、6倍量分别回流2、1、1h和95％乙醇加热回流1.5h药渣再用50％乙醇回流1.5h)制备的干燥体约0.2g研细并精密称定，置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量超声处理15min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5mL置25mL量瓶用甲醇定容即得。 　　2.1.5精密度试验考察分别精密吸取同一对照品溶液5μL,连续进样5次,结果所得丹参酮ⅡA的 RSD为1.68%。 　　2.1.6重复性试验考察取5份同一批样品,按供试品溶液制备方法制备,进行测定,结果,丹参酮ⅡA的平均含量RSD为2.6%。 　　2.1.7稳定性试验考察取同一供试品溶液,按0、2、4、6、8h时间间隔,分别进样分析,测定色谱峰面积,结果丹参酮ⅡA在8h内稳定,RSD为2.3%。 　　2.1.8回收率试验考察精密称取已测知丹参酮ⅡA含量的样品及一定量的对照品(共5份)按样品含量测定项下方法操作,测定,结果丹参酮ⅡA平均回收率为99.7%,RSD为2.6%。 　　2.1.9样品测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL,注入高效液相色谱仪,按外标法计算。 　　2.1.10实验结果见表1和表2。 　　 　　2.2丹酚酸B的含量测定方法 　　2.2.1色谱条件