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纸片协同法检测产金属酶铜绿假单胞菌 　　【摘要】 目的 探讨纸片协同法筛查产金属酶铜绿假单胞菌在临床应用中的实用性。方法 采用EDTA- Na2和2-巯基丙酸纸片琼脂扩散法来检测金属酶。结果 64株亚胺培南或头孢他啶耐药的铜绿假单胞菌共检出产金属酶9株，阳性率为14．1%。结论 纸片协同扩散法是一种简便、敏感的检测产金属酶铜绿假单胞菌的方法，可用于临床常规检测。? 　　【关键词】金属酶;铜绿假单胞菌;耐药性 　　 　　The disk diffusion methods for screening pseudomonas aeruginosa producing metallo-β-lactamase 　　 　　LIAO Kang，HUANG WEI-qiao,CHEN Dong-mei,et al.Department of Clinical Laboratory,the First Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University,Guangdong 510080,China 　　? 　　【Abstract】 Objective To investigate the feasibility of the disk diffusion methods for screening Pseudomonas aeruginosa producing metallo-β-lactamase.Methods Metallo-β-lactamases produced by Pseudomonas aeruginosa was detected by using 2-mercaptopropionic acid and EDTA-Na2 in the M-H agar.Results 64 Pseudomonas aeruginosa which resistance for Imipenem acid or Ceftazidime have 9 producing metallo-β-lactamase.The proportion of positive is 14．1%.Conclusion The methodissimple,convenient and sensitive for screening metallo-β-lactamase-producing bacteria.? 　　【Key words】Metallo-β-lactamases;Pseudomonas aeruginosa;Resistance 　　 　　铜绿假单胞菌(PA)广泛存在于医院环境中，是引起院内感染的主要病原菌。随着广谱抗生素的广泛应用，铜绿假单胞菌的耐药菌株逐年增多，近年来一类获得性的能够水解碳青酶烯类抗生素的新的β-内酰胺酶-金属酶(MBLS)的产生，对抗生素的使用造成了更大的威胁。铜绿假单胞菌中编码耐药金属酶质粒的存在，不仅可造成同种细菌，也可能造成异种细菌之间耐药传播[1]。传递性耐药质粒耐药产生快，传播广，危害性极大，成为全球共同关注的问题[2]。本试验采用EDTA-Na2和2-巯基丙酸纸片扩散法来检测铜绿假单胞菌的金属酶，并对其耐药性进行分析。? 　　1 材料与方法? 　　1．1 材料? 　　1．1．1 菌株来源 中山大学附属第一医院2006年1月至2006年12月临床分离的亚胺培南(IPM)或头孢他啶(CAZ)耐药的铜绿假单胞菌64株。? 　　1．1．2 质控菌株 阴性对照菌株ATCC27853 ，购自卫???部临床检验中心；阳性对照菌株IMP-2和VIM-1型的临床分离的铜绿假单胞菌，由浙江医科大学附一院检验科杨青老师惠赠。? 　　1．1．3 药敏纸片 英国OXOID公司CAZ(30 μg/片)和IPM(30 μg/片)纸片。? 　　1．1．4 化学试剂 500nMEDTA-Na2，购自广东汕头兴宇化工厂(分析纯)；2-巯基丙酸，购自美国Sigma公司。? 　　1．2 方法? 　　1．2．1 细菌培养和鉴定 细菌培养根据临床检验操作规程按常规方法进行，鉴定采用VITEK-60全自动微生物鉴定系统鉴定结果。? 　　1．2．2 抗生素敏感试验 采用纸片琼脂扩散法(K-B法)，按美国NCCLS抗微生物敏感性试验M2-A8标准(第十六版信息增刊)判断结果。? 　　1．2．3 产金属酶铜绿假单胞菌的检测 参照Arakawa Y等的相关文献[4]并做相应调整后操作如下:在MH平板上涂布受试菌液，两IPM药敏纸片贴于平板上；与一IPM纸片相距1．0~1．5 cm处贴一张含10 μl EDTA-Na2纸片，与另一IPM纸片相距1．5~2．5 cm处贴一张含3