非co2依赖型细胞培养系统对膀胱癌t-24细胞增殖的影响-effects of co2 - independent cell culture system on proliferation of bladder cancer t - 24 cells.docxVIP

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2018-05-29 发布于上海
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非co2依赖型细胞培养系统对膀胱癌t-24细胞增殖的影响-effects of co2 - independent cell culture system on proliferation of bladder cancer t - 24 cells

目录中文摘要 ……………………………………………………………………Ⅰ ABSTRACT …………………………………………………………………Ⅲ 符号说明………………………………………………………………………Ⅵ 前言 ………………………………………………………………………1 非 CO2 依赖型细胞培养系统对膀胱癌 T-24 细胞增殖的影响………………31 材料和方法……………………………………………………………………31.1 主要仪器设备………………………………………………………………31.2 实验材料及主要试剂………………………………………………………31.3 试剂的配制…………………………………………………………………41.4 实验分组……………………………………………………………………51.5 细胞培养……………………………………………………………………61.6 两种系统培养基 pH 值测定………………………………………………61.7 克隆形成计数………………………………………………………………61.8 细胞增殖曲线测定…………………………………………………………71.9 流式细胞仪检测细胞的凋亡率及对细胞周期的影响……………………71.10 survivin、caspase-3 测定…………………………………………………7West blot 法 survivin、caspase-3 蛋白测定………………………………9 2 结果…………………………………………………………………………122.1 培养基 pH 值的比较………………………………………………………132.2 克隆数的比较……………………………………………………………132.3 增殖曲线的比较…………………………………………………………142.4 细胞周期及凋亡率的比较………………………………………………142.5 survivin、caspase-3 因子的表达比较……………………………………162.6 survivin、caspase-3 蛋白的表达比较……………………………………173 讨论…………………………………………………………………………18 参考文献 ……………………………………………………………………20附录 …………………………………………………………………………22 综述……………………………………………………………………………22非 CO2 依赖型细胞培养系统对膀胱癌 T-24 细胞增殖的影响中文摘要目的探讨非 CO2 依赖型细胞培养系统对膀胱癌 T-24 细胞增殖的影响，非 CO2 依赖型细胞培养系统与 CO2 依赖型细胞培养系统有无区别。方法对膀胱癌 T-24 细胞采取非 CO2 依赖型细胞培养系统在（37℃ 、大气环境) 培养箱（称为大气-B 组）和（37℃、5%CO2）培养箱（称为 CO2-B 组）条件下，及 CO2 依赖型细胞培养系统在（37℃、大气环境) 培养箱（称为大气-A 组）和（37℃、5%CO2）培养箱（称为 CO2-A 组）条件下进行培养，检测分析两种体系培养基连续 7 天 pH 的比较；采用细胞增殖曲线及克隆形成实验检测细胞生长差异情况；采用流式细胞术检测分析两种系统对细胞周期及凋亡率影响的比较；并使用 RT-PCR、Western blot 技术检测分析两种系统下的膀胱癌细胞中 survivin、caspase-3 基因及蛋白的表达情况。结果 1、pH 值：非 CO2 依赖型细胞培养系统（37℃、大气环境)培养箱条件下培养基与 CO2 依赖型细胞培养系统（37℃、5%CO2）培养箱条件下培养基连续 7 天 pH 值稳定在 7.4 左右（P0.05）；而 CO2 依赖型细胞培养系统（37℃、大气环境) 培养箱条件下培养基 pH 值在 8.8 左右，其高于 CO2 依赖型细胞培养系统（37℃、5%CO2）培养箱条件下培养基 pH 值（P0.05）。2、细胞克隆数：大气-B 组细胞克隆数（324±11）与 CO2-A 组（320±15）细胞克隆数基本相同（P0.05）；而大气-A 组细胞克隆数（66±6）比 CO2-A 组细胞克隆数减少（P0.05）。3、细胞生长增殖曲线：大气-B 组与 CO2-A 组细胞生长增殖趋势基本一致（P0.05）；而大气-A 组比 CO2-A 组细胞生长增殖下降（P0.05）。4、细胞凋亡率：细胞在大气-B 组与 CO2-A 组条件下培养，随着作用时间的延长细胞凋亡数增加，凋亡率相比无明显变化（P0.05）；而在大气-A 组条件下比 CO2-A 组条件下细胞凋亡数增加（P0.05）。5、RT-PCR 及 Western blot：细胞在大气-B 组与