防龋基因疫苗pvax1-spapp pvax1-gbpagbd和pvax1-spapp-gbpagbd以温敏型生物降解水凝胶为载体经不同途径免疫sd大鼠的实验研究-experimental study on anti-caries gene vaccines pvax 1 - spa pp pvax 1 - gbpagbd and pvax 1 - spa pp - gbpagbd immunizing sd rats by differe.docxVIP

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2018-05-29 发布于上海
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防龋基因疫苗pvax1-spapp pvax1-gbpagbd和pvax1-spapp-gbpagbd以温敏型生物降解水凝胶为载体经不同途径免疫sd大鼠的实验研究-experimental study on anti-caries gene vaccines pvax 1 - spa pp pvax 1 - gbpagbd and pvax 1 - spa pp - gbpagbd immunizing sd rats by differe.docx

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防龋基因疫苗pvax1-spapp pvax1-gbpagbd和pvax1-spapp-gbpagbd以温敏型生物降解水凝胶为载体经不同途径免疫sd大鼠的实验研究-experimental study on anti-caries gene vaccines pvax 1 - spa pp pvax 1 - gbpagbd and pvax 1 - spa pp - gbpagbd immunizing sd rats by differe

英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称Ampampicillin氨苄青霉素 BSAbovine serum albumin牛血清白蛋白 DDWdouble distilled water双蒸水ELISAenzyme-linked immunosorbentassay酶联免疫吸附测定法E.coliEscherichia coli大肠杆菌 EDTAethylenediamine-tetraacetic acid乙二胺四乙酸 GTFGlucosyltransferase葡糖基转移酶HRPhorseradish peroxidase辣根过氧化物酶IgImmunoglobulin免疫球蛋白IgGImmunoglobulinG免疫球蛋白 GLCSTLowerCriticalSolutionTemperature最低临界共溶温度ODoptical density光密度PEGPolyethylene Glyco聚乙二醇PBSphosphate buffer solution磷酸盐缓冲液SpaP/Acell surface protein antigen A表面蛋白抗原 A 区SpaP/Psurface protein antigen表面蛋白抗原 P 区S.mutansstreptococcus mutans变异链球菌S-IgAsecretory immunoglobulinA分泌型免疫球蛋白 ATMB3,3,5,5-tetramethyl benzidin3,3,5,5-四甲基联苯胺67防龋基因疫苗 pVAX1-SpaP/P、pVAX1-GbpA/GBD 和pVAX1-SpaP/P-GbpA/GBD 以温敏型生物降解水凝胶为载体经不同途径免疫 SD 大鼠的实验研究摘要目的: 观察以防龋基因疫苗 pVAX1-Spap/P、pVAX1-GbpA/GBD、pVAX1-Spap/P-GbpA/GBD 搭载温敏型生物降解水凝胶 PLGA-PEG-PLGA 经股四头肌注射、口服、颌下腺周注射以及鼻腔粘膜滴注四种不同途径免疫 SD 大鼠，观察诱导特异性抗体产生的动态变化、模型动物的防龋效果，重组质粒在免疫部位的原位表达情况以及免疫动物的一般安全性检查，并探索水凝胶作为缓释载体条件下的最佳免疫途径。方法：本实验包括两部分：实验一：利用质粒纯化试剂盒大量抽提重组质粒 pVAX1-Spap/P、pVAX1-GbpA/GBD、 pVAX1-Spap/P-GbpA/GBD 以及空载体质粒 pVAX1，采用双酶切鉴定正确后，抽提并贮存以备免疫动物使用。实验二：以温敏型生物降解水凝胶 PLGA-PEG-PLGA 作为载体的重组质粒 pVAX1-Spap/P 、 pVAX1-GbpA/GBD 、 pVAX1-Spap/P-GbpA/GBD 以及空载体质粒 pVAX1 免疫 SD 大鼠。鼠龄为 21d 的雄性 SD 大鼠 90 只，分为四个大组，每大组随机分为四个小组，每组 6 只。A 大组：24 只 SD 大鼠，随机分为 4 组，每组 6 只。 A1 组：pVAX1-SpaP/P 股四头肌注射组；A2 组：pVAX1-SpaP/P 颌下腺区皮下注射组； A3 组：pVAX1-SpaP/P 鼻腔黏膜滴注组；A4 组：pVAX1-SpaP/P 口服组。B 大组：24 只 SD 大鼠，随机分为 4 组，每组 6 只。B1 组：pVAX1-GbpA/GBD 股四头肌注射组； B2 组：pVAX1-GbpA/GBD 颌下腺区皮下注射组；B3 组：pVAX1-GbpA/GBD 鼻腔黏膜滴注组；B4 组：pVAX1-GbpA/GBD 口服组。C 大组：24 只 SD 大鼠，随机分为 4 组，每组 6 只。 C1 组： pVAX1-SpaP/P-GbpA/GBD 股四头肌注射组； C2 组： pVAX1-SpaP/P-GbpA/GBD 颌下腺区皮下注射组；C3 组：pVAX1-SpaP/P-GbpA/GBD 鼻腔黏膜滴注组；C4 组：pVAX1-SpaP/P-GbpA/GBD 口服组。D 大组(对照组)：18 只 SD 大鼠，随机分为 3 组，每组 6 只。D1 组：空载质粒 pVAX1 股四头肌注射组；68D2 组：空载体质粒 pVAX1 口服组；D3 组：生理盐水股四头肌注射组。将 100μg 重组质粒与 0.4ml 20%水凝胶 PLGA-PEG-PLGA 混合制备疫苗；建立龋齿模型；免疫剂量:每次免疫剂量为 100μg/只，共免疫 3 次，鼠龄第 28d 开始首次免疫，每周一次，相同剂量连续免疫三周；收集样本：分别于免疫前 1 天和免疫后第 1-10 周收集血液与唾液样本；处死动物后，称重，对心，肝，脾