人感染高致病性禽流感实验室检测技术方案.doc

人感染高致病性禽流感实验室检测技术方案（试行） 本方案是为指导实验室检测禽流感病毒而制定。 一、病毒实验室安全 病毒检测实验室的生物安全应按微生物生物安全分类要求在P3级实验室进行。 二、标本的采集、运送 1、采集标本的种类：疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液、血液以及死亡病例的尸检组织。 2、采集标本时间：用于分离病毒的标本应为发病2~3天，最好不超过7天。用于血清检测的标本应采集急性期和恢复期的双份血液。急性期尽早采集，最迟不超过发病后7天,恢复期血清应在发病后14天后采集。 3、标本的运送：参照中国疾病预防控制中心关于SARS标本运送要求。 4、采集时的防护：疑似病例的标本应参照SARS标本采集求。 三、检测程序 1、疑似病例咽拭子或含漱液、鼻拭子和尸检组织 （1）病毒分离、鉴定 用组织培养和鸡胚分离法。具体方法同常规人流感检测，详见《全国监测方案（试行）》（中疾控发[2003]445号）附件。不同的是鸡胚接种一定要用SPF鸡胚。 鸡胚或细胞培养物进一步用HA和HI试验鉴定，方法见（中疾控发[2003]445号）附件。试验试剂用WHO提供的试剂盒。 经HI试验H5抗体阳性者报送国家流感中心。HA阳性HI试验H5阴性，也送国家流感中心。 （2）RT-PCR或实时RT-PCR试验 该方法可作为早期实验室诊断的参考依据。可和病毒分离培养同时进行，帮助早期判定。 2、疑似病例血清的检测 （1）感染早期的血清标本 用于病毒分离培养方法同上。同时要留部分作为双份血清的急性期血清备用。 （2）感染7天以后的血清标本 与急性期血清配对同时做HI试验检测，方法见（中疾控发[2003]445号）附件。 3、常规检测中可疑标本 在常规流感监测中实验室发现HA阳性而血清H1、H3和B型血清皆不抑制标本，应用H5试剂盒做鉴定。 四、检测结果 1、分离到病毒，HI试验H5抗体阳性或同时PCR试验H5阳性，可报禽流感H5型阳性，送国家流感中心复核。 2、分离到病毒，HI试验H5抗体阴性，PCR试验H5阳性者，原始标本送国家流感中心进一步检测。 3、恢复期H5抗体较急性期抗体4倍增高，可报禽流感H5型阳性，送国家流感中心复核。 4、HA阳性但HI试验H5阴性，需进一步做中和实验确定，或者送国家流感中心进一步确定。 附件 为做好与感染禽流感的家禽密切接触人员的防护工作，特制订本原则。 一、防护用品标准 防护用品应符合国家医用级的标准。 （一）防护服 应符合《医用一次性防护服技术要求》（GB19082-2003），由帽子、上衣、裤子组成，可为连体式或分体式结构，穿脱方便，结合部严密。袖口、脚踝口应为弹性收口，帽子面部收口和腰部可采用弹性收口或拉绳收口。具有良好的防水性、抗静电性、过滤效率和无皮肤刺激性。 （二）防护口罩 应符合《医用防护口罩技术要求》（GB19083-2003）。口罩可分为长方型和密合型，应配有鼻夹，具有良好的表面抗湿性、对皮肤无刺激。气流阻力：在空气流量为85L/min的情况下，吸气阻力不得超过35mmH2O，滤料的颗粒过滤效率应不小于95%。 （三）手套 医用一次性乳胶手套。 （四）长筒靴或可消毒的保护性脚套 防水、防污染。 二、防护原则 （一）适用范围 与感染禽流感的家禽密切接触的工作人员，包括从事养殖、分拣、运送、销售、捕杀工作和死禽处理等的人员，以及对有关场所进行终末消毒的专业人员。 （二）防护要求 1、防护要求为穿普通工作服、外罩一层防护服（隔离衣），戴口罩、乳胶手套，穿长筒靴或戴可消毒的保护性脚套。 2、每次接触动物后立即进行手部清洗（见图）和消毒。离开污染区时，脱防护服前用流水及肥皂冲洗手一次，脱防护服后再次用流水及肥皂冲洗手，每次冲洗1分钟左右。手消毒用0.30.5%碘伏消毒液或快速手消毒剂洗必泰醇、新洁尔灭醇、75%酒精等揉搓13分钟。标准的洗手方法，见下图： 1.掌心对掌心搓擦 2.手指交错掌心对手背搓擦 3.手指交错掌心对掌心搓擦 4.两手互握互搓指背 5.拇指在掌中转动搓擦 6.指尖在掌心中搓擦 注意呼吸道及粘膜防护。（）其他要求建议有明确吸入可疑感染物质的人员（例如，分拣员和参与贸易市场大规模分拣的工作人员）应预防性服用抗病毒药物，如金刚烷胺、金刚乙胺等。2、建议与感染或可疑感染禽流感的禽类动物有密切接触的人员接种流感疫苗以降低同时感染人类流感和禽