生物化学DNA replication DNA的生物合成教学讲义.pptVIP

* * 第三篇 细胞信息转导 生物工程研究所 刘 树滔 stliu@fzu.edu.cn DNA通过复制将遗传信息由亲代传递给子代； 通过转录和翻译，将遗传信息传递给蛋白质分子，从而决定生物的表现型。 DNA的复制、转录和翻译过程就构成了中心法则。 第13章 核酸代谢 動画 DNA复制 第二节 DNA的生物合成 特点：一、半保留复制 DNA在复制时，以亲代DNA的每一股作模板，合成完全相同的两个双链子代DNA，每个子代DNA中都含有一股亲代DNA链，这种现象称为DNA的半保留复制(semi-conservative replication)。 二、有一定的复制起始点 DNA在复制时，需在特定的位点（复制起始点）起始，这是一些具有特定核苷酸排列顺序的片段。在原核生物通常为一个，而真核生物则为多个。 五、半不连续复制 由于DNA聚合酶只能以5→3方向聚合子代DNA链，即模板DNA链的方向必须为3→5。因此，分别以两条亲代DNA链作为模板聚合子代DNA链时的方式是不同的。 以3‘→5’方向的亲代DNA链作模板的子代链在复制时基本上是连续进行的，其子代链的聚合方向为5‘→3’，这一条链被称为先导链(leading strand)。而以5‘→3’方向的亲代DNA链为模板的子代链在复制时则是不连续的，其链的聚合方向也是5‘→3’，这条链被称为后续链(lagging strand)。 由于亲代DNA双链在复制时是逐步解开的，因此，随从链的合成也是一段一段的。DNA在复制时，由随从链所形成的一些子代DNA短链称为冈崎片段(Okazaki fragment)。 冈崎片段的大小，在原核生物中约为1000～2000个核苷酸，而在真核生物中约为100个核苷酸。 六、DNA复制的保真性： 保证遗传的稳定。 与下列因素有关： 1．遵守严格的碱基配对规律； 2．对复制过程中出现的错误及时校正。 DNA复制的条件 一、底物 以四种脱氧核糖核苷酸(deoxynucleotide triphosphate)为底物，即dATP，dGTP，dCTP，dTTP。 ? (dNMP)n+dNTP (dNMP)n+1+PPi 二、模板(template) DNA复制是模板依赖性的，必须要以亲代DNA链作为模板。亲代DNA的两股链解开后，可分别作为模板进行复制。 三、引发体和RNA引物 引发体(primosome)由引发前体与引物酶（primase）组装而成。 引发体具有引物酶活性 引物酶本质上是一种依赖DNA的RNA聚合酶，该酶以DNA为模板，聚合一段RNA短链引物(primer)，以提供自由的3-OH，使子代DNA链能够开始聚合。 四、DNA聚合酶 (DDDP) （一）种类和生理功能： 在原核生物中，目前发现的DNA聚合酶有三种，分别命名为DNA聚合酶Ⅰ（pol Ⅰ），DNA聚合酶Ⅱ（pol Ⅱ），DNA聚合酶Ⅲ（pol Ⅲ），这三种酶都属于具有多种酶活性的多功能酶。参与DNA复制的主要是pol Ⅲ和pol Ⅰ。 原核生物中的三种DNA聚合酶? 在真核生物中，DNA聚合酶有五种： DNA聚合酶α（pol α），参与染色体DNA复制延长随从链 DNA聚合酶β（pol β），在其他聚合酶无活性时才发挥作用 DNA聚合酶γ（pol γ），参与线粒体DNA复制 DNA聚合酶δ（pol δ），延长领头链 DNA聚合酶ε（pol ε），DNA损伤修复、校读和填补缺口 五、DNA连接酶 DNA连接酶(DNA ligase)可催化两段DNA片段之间磷酸二酯键的形成，而使两段DNA连接起来。 六、单链DNA结合蛋白 单链DNA结合蛋白（single strand binding protein, SSB）又称螺旋反稳蛋白（HDP）。这是一些能够与单链DNA结合的蛋白质因子。其作用为：① 使解开双螺旋后的DNA单链能够稳定存在，即稳定单链DNA，便于以其为模板复制子代DNA；② 保护单链DNA，避免核酸酶的降解。 七、解螺旋酶 解螺旋酶（unwinding enzyme） ，又称解链酶或rep蛋白，是用于解开DNA双链的酶蛋白，每解开一对碱基，需消耗两分子ATP。目前发现存在至少存在两种解螺旋酶。 八、拓扑异构酶(topoisomerase) 拓扑异构酶Ⅰ可使DNA双链中的一条链切断，松开双螺旋后再将DNA链连接起来，从而避免出现链的缠绕。拓扑异构酶Ⅱ可切断DNA双链，使DNA的超螺旋松解后，再将其连接起来。 大肠杆菌拓朴异构酶Ⅰ的结构 DNA生物合成过程 一、复制的起始 DNA复制的起始阶段，由下列两步构成。 （一）预引发： 1．解旋解链，形成复制叉： 由拓扑异构酶和解