pcv2 orf2ppv vp2核酸疫苗的构建及猪ifnγ对其分子佐剂效应的研究-construction of pc v2 or f2 ppv vp2 nucleic acid vaccine and study on the effect of porcine ifn γ on its molecular adjuvant.docxVIP

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2018-06-01 发布于上海
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pcv2 orf2ppv vp2核酸疫苗的构建及猪ifnγ对其分子佐剂效应的研究-construction of pc v2 or f2 ppv vp2 nucleic acid vaccine and study on the effect of porcine ifn γ on its molecular adjuvant

州州州啡，州州州qdw mm川nu唰呻咄咄AE·州州wnu川川川OOM川w d1，州州Y中文摘要猪细小病毒 (Procine parvovirus ，PPV) ，属于细小病毒科(Parvoviridae) 、细小病毒屑的成员，是引起母猪繁殖障碍 (reproductive failure) 的主要病原体之…。各种不同类型的猪均可感染，引起母猪发生流产、胚胎死亡、胎儿畸形、胎儿木乃伊化及不孕等。猪困环病毒 2型 (Porcine Circovirus type 2 ，PCV-2) 是猪断奶后多系统衰竭综合征 (PMWS) 的主要病原，临床表现为进行性消瘦，皮肤苍白或黄植。目前这两种传染病在猪场并发或继发感染现象较为普遍，给养猪业造成了巨大的经济损失，因此，为了预防和控制这些疾病，安全、高效的疫苗是首要的解决途径。干扰素叩(IFN-y)在免疫调节中其重要作用，它能激活巨噬细胞、上调 MHCI 、 II类分子表达水平和促进抗原提里，诱导 η1细胞的分化等，被广泛应用于 DNA疫苗佐剂的研究中。本研究将猪困环病毒 II 型 OR凹的 B 细胞表位基因 (47-85aa) 重组到猪细小病毒 SC-l 株 VP2 基阔的 N 端，构建了真核表达质粒 pCI-OVo 再通过基因柔性 Linker 将猪 IFN叩基因定向克降到该载体，构建重组质粒 pCI-IOV. 将阳性真核质粒转染 Vero 细胞，采用 RT-PCR 索和间接免疫荧光法检测技术确定产物的表达情况:用 M丁T 法检测产物的生物活性。结果显示，在转染重组质粒的哺乳动物细胞中既能扩增到目的基因，也能检测到特异性蛋白的表达，证实其表达蛋白具有显著的生物学活性。将重组质粒 pCI唰 OV ，pCI-IOV ，对照质粒pCI-n∞， PBS ，猪细小病毒灭活菌，猪困环病毒亚单位疫茵通过肌肉往射免疫小鼠，检测小鼠不同时期的淋巴细胞转化功能， T 淋巴细胞亚群动态变化情况以及 PPV ，PCV2 抗体水平。结果显示，重组质粒免疫小鼠后均能刺激机体产生良好的免疫应答，且pCI-IOV 免疫小鼠脾淋巴细胞转化功能， CD矿、 CD8可淋巴细胞的数蟹和血清 PPVIPCV2 抗体的 OD 值在二免后均高于成显著高于细小灭活苗组、因环亚单位苗组和 pCI-OV 对照组。结果表明，猪 IFN幡 Y 作为细胞因子佐剂能显著增强 VP2/0RF2 核酸疫苗诱导的免疫应答，黯体效果高于普通疫苗组。研究结果为 PPV 和 PCV2 新型疫苗的研究提供了数据参考。于一免后 24h 、7d、14 d、21 d、28 d、35 d、49d 、及105 d 采集小鼠的心、肝、牌、肺、肾、肌肉，提取各组织 DNA 进行 PCR 扩增。以纯化后的组织总 DNA 为模板， PCR 法检测质粒 DNA 整合到小鼠细胞染色体基因组上的可能性，评价疫茵的安全性。结果表明，一免后 24h、7d、14 d、21 d、28 d、35 d 及 49d 能在小鼠血液及各检测的组织器官检测到重组质粒:一免后 105 d 不能检测到重组质粒。纯化后的组织基因组 DNA 经 PCR 扩增均呈阴性，米发现整合情况，证实该 DNA‘疫苗安全性好。关键词z 猪细小病毒:猪困环病毒; VP2 基因; ORF2 基因:干扰素-(11英文摘要Development of Bivalent Genetic Gngineering Vaccine Against Porcine CircovirusType 2 and Porcine Parvovirus and Research about tbe Molecule Adjuvant配ffect of Porcine IFN吁 to tbis DNA VaccineYanling Chen (Preventive Veterinary Medcine)Directed by Prof:Zhiwen Xu;Pro f.Wanzhu Guo， (Sichuan Agriculture University，Yaan，Sichuan，P.R.China，625014)AbstractProcine parvovirus (PPV) is one of the m句or etiological agent of reproductive fai1ure in pigs.lt belongs to the fami1y Parvoviridae.Pigs of a11 ages are susc叩tible t。他功lllS，η1e clinical 时gns of PPV are charac阳izedby