pcv2 orf2ppv vp2核酸疫苗的构建及猪il2对其分子佐剂效应的研究-construction of pc v2 or f2 ppv vp2 nucleic acid vaccine and study on the effect of porcine il2 on its molecular adjuvant.docxVIP

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2018-06-01 发布于上海
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pcv2 orf2ppv vp2核酸疫苗的构建及猪il2对其分子佐剂效应的研究-construction of pc v2 or f2 ppv vp2 nucleic acid vaccine and study on the effect of porcine il2 on its molecular adjuvant

喇喇喇『，唰唰州。d州州4.唰恻Wm川al唰唰唰AU州川川川OOMM川AE恻川Y摘要猪细小病毒 (Porcine parvovirus ，PPV)是引起猪繁殖障碍的重要病原之一。 PCV2 是猪断奶后多系统衰竭综合征 (PMWS) 的主要病原，临床表现为进行性消瘦，皮肤苍白或黄瘤。 PPV 和 PCV2 均为无囊膜 DNA 病毒，基因组较小，二者对分化快的组织如淋巴结均具很强的来嗜性。 PPV 的感染能够剌激细胞进入细胞分裂的 S 期，从而促进了 PCV2 在细胞中的复制，使得 PMW8 的症状更加严重。如果能够有效地控制 PCV2 或/和 PPV 的感染，对于控制 PMWS 的发生具有及其重要的意义。有研究发现 IL-2 能通过多种环节促进丁细胞的增殖、活化，并能剌激MHCII 类抗原等多种细胞表面分子的表达和多种细胞因子的产生，并巳被广泛应用于 DNA 疫苗佐剂的研究中。本研究将扩增得到的 PPV 8C-1 株 VP2 基因、 PCV20RF2 抗原多肤基因克降到真核表达载体 pCI-neo 后构建真核表达质粒 pCI-ORF2 飞VP2 ，再通过基因梁性Lnik町将猪 IL-2 基因定向克降到该载体，构建盘组质粒 pCI-IL-2-0RF2 飞VP20 将阳性真核质粒转染 PK15 细胞，采用间接免搜荧光法和 ELISA 法检测其表达产物的免疫学活性。结果显示，所构建的真核质粒均能正常表达，且意组蛋白可分别与 ORF2NP2 多扰和 PoIL-2 蛋白抗血清发生特异性免疫反应。将真核质粒免疫 BALA/c 鼠，同时设立猪细小病毒灭活苗、猪圆环病毒亚单位苗和 pCI 空载体对照组，检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞的转化功能，外周血丁淋巴细胞亚群的动态变化及血清 PCV2 ，PPV 抗体效价。结果显示，意组质粒免疫小鼠后均能剌激机体产生良好的免疫应答，且 pCI-IL-2-0RF2 飞VP2 免疫小鼠脾脏淋巴细胞转化功能， CD/、CD8可淋巴细胞的数量和血清 PPVIPCV2 抗体的 OD 值在工免后均高于或显著高于猪细小病毒灭活苗组、猪圆环病毒亚单位苗组和 pCI-OR 凹-VP2 对照组。结果表明，猪 IL-2 作为细胞因子佐剂能显著增强 VP2/0R凹核酸疫苗诱导的免疫应答。研究结果为 PPV 和 PCV2 的新型基因熏组疫苗的研究提供了数据参考。关键词:猪细小病毒:猪困环病毒; VP2 基因; ORF2 基因:白介索 2Research about the Molecule Adjuvant Effect of Porcine IL嗣2 to the PCV2 ORF2/PPV VP2 DNA VaccineXU Kai (Preventive Veterinary Medcine)Directed by Prof: Zhiwen Xu; Prof. Wanzhu Guo， (Sichuan Agriculture University，Yaan，Sichuan卫R.China，625014)AbstractPorcine parvovirus is one of the important pathogens of porcine reproductive disorders. PCV2 is the main cause for Pigs multiple system failure syndromes after weaned (PMWS)， which clinical manifestations are weight loss，pale skin，or jaundice. Both the PPV andPCV2 are not enveloped and small genomes. Fast on the differentiation between the two organizations such as the lymph nodes is a strong tropism. The PPV infection can stimulate cells to ent町 S phase of cell division，thus promoting the replication of PCV2 in the cellwhich making the symptoms more severe PMWS. If PCV2 and or PPV infection ωntrolling effectively，it will be significanceωcontrol the occuηence of PMWS. IL 2