微流控电泳芯片在单细胞阐发中的应用.pdf

塑查查堂塑圭兰垡篓塞—— 中文摘要 微流控分析系统(gTAS)在生物细胞领域的发展引起了广泛的关注。微流控 芯片鳃皴米尺寸豹通遂嚣逶舍擎缨躯群熬戆弓l入，捺缴，反痘，分离蟊捻溅。辫 此将这些功能集成在微流控芯片上成为巍前分析的一个热点。本论文用微流控电 溶芯片对攀缀骢分援送行一些磷究。主黉分三部分：i．徽流控魄泳芯片电纯攀输 测人单个肝癌细胞中的谷胱甘肽。II．人单个活细胞中过氧化物酶的测定。III．BF 和CN。对活细胞内酶活性的影响。 第一部分用微漉控电泳芯片电化学捡测的方法测定了人单个翳癌缁胞中鲍谷 +砒甘肽。我们选择用电泳缓冲液代替常用的PBS作为细胞悬浮液，用压力将单 个缀腿导入蕊冀麴双T交叉点，鼹毛逑黄皂蛩纯学镘魏帮努熬遣缓撼缝合豹漆 腆方式，利用金汞齐电极对谷胱甘肽良好的选择性检测得到单个细胞中锝胱甘肽 潦一熬电泳峰。实褒了芯片毛缨镑毫溶艟l拖学稔溅荤缨藏豹快蘧分离饶势及选耩 性检测。然后用标准曲线对细胞中谷胱甘肽的含餐进行了定量，测得人单个肝癌 缁藤中谷虢营酝含量与文献篷一皴。 第二部分建立了一种徽流控电泳芯片电化学检测人单个活细胞内髓过氧化物 酶(MPO)的方法。我们先用毛地黄皂替将细胞蚀孔，然后通过电迁移将蚀孔詹 鲍单个t夸性粒鳃腿导入芯慧双T交叉点菸贴壁。缓狰滚中底戆H2Q黧8202遴 过细胞膜上的微孔扩散进入细胞，被胞内MPO催化反碰生成电活性产物BQ。 BQ通过纲照骥上微孑L扩散强裂缨瞧翅圉夔溶滚中，在缨蕤簿交澎或BQ区粢。 辩加电泳电压将此区带迁移到分离通道的检测端并用碳纤维微盘电极检测。得到 静瞧溶蜂豹峰瑟积对应予活缡魏内MPO鹩含量。通过阍一个绸胞溶貘麓电泳潍 黼积及标猴溶液电泳峰的峰面积可以对活细胞内MPO进行定量。测得人单个中 穗粒细穗内MPO含量与纲脆提取液中测得值一致。 第三郏分研究了Br～和CN一对人擎个活中性粒缨孵凌MPO滠瞧鳇嚣嘀。 moj／L Br一和CN一对胞内MPO影响a#常明照。2．5x10。2 Br‘对中性粒细胞中 MPO刺激40 rain质其活性降为鼹来鲍32％。5x104mol／L CN慰中蛙数缨戆孛 MPO活性的抑制作用更显著，40 rain后其活性降为原来的7．8％。 主题词：微流控芯片，毛细管电泳，电化学检测，单细胞分析 Abstract fordeterminationof ofthree method Thisthesisconsists I，a Chapter parts：In microfluidic described GSlIin human was by chip single hepatocarcinoma(HH)cells electrode。A detectionat microdisk withelectrochemical single gold／mereuryamalg