用交联的方法研究亲免卵白的相互作用卵白及mFKBP23卵白结晶条件的探索.pdfVIP

摘要 摘要 本文分为两部分：第一部分是用交联的方法研究内质网体中亲免蛋白 FKBP23和细胞核中亲免蛋白CyP33的相互作用蛋白，第二部分是免疫抑制剂 FK506以及雷帕霉素在内质网体中的受体蛋白FKBP23结晶条件的探索。 本文的第一部分研究是利用交联的方法研究内质网体中FKBP23和细胞核 中CyP33的相互作用蛋白。化学交联法属于蛋白质化学修饰的延伸，是不同化 学功能基团通过共价键连接的技术。交联反应是亲核取代反应的一种，交联剂 可以和蛋白质的亲核侧链以及多肽末端的活性氨基酸一发生化学交联反应，从 而在交联剂与蛋白质之间形成共价键。拥有双化学反应基团的交联剂便可以连 接在体系内相互作用的蛋白质，进而发现和研究体系内蛋白之间的相互作用及 其功能。 在我们组以前的工作中就表明了在哺乳动物内质网体中的蛋白FKBP23和 BiP可以特异性的结合。本课题尝试通过化学交联和免疫共沉淀的方法在内质网 体中寻找与FKBP23相结合的其它未知蛋白，以及在细胞核中与CyP33的相互 作用蛋白，通过使用DSP进行化学交联实验，我们在细胞核内发现了与CyP33 相互作用的两种未知蛋白，并得到了用考马斯亮蓝染色后的未知蛋白条带。 本文的第二部分工作是协助冯淼在上海姚明康德新药开发有限公司进行免 行了初步的筛选和优化，尝试将蛋白晶体进行x一射线衍射实验以得到蛋白的结 构数据。 关键词：化学交联；免疫抑制剂；FKBP23；CyP33；蛋白结晶 Abstract 。——————————————————————————————————————————一 Abstract oftwo first FKBP23’S is investigates Thisdissertation part composedparts：the secondofthis chemical part and 3’sbindingproteinsby cross—linking．The CyP3 on and ofmFKBP23． focuses dissertation crystallization purification and 3’S FKBP23’S by Inthefirst Cyp3bindingproteins part，weinvestigates chemical isthe ofdifferent chemical technology crosslinking cross—linking．Chemical the toanextensionof prot