治疗白癜风外用中药对大鼠皮肤微环境影响.docVIP

治疗白癜风外用中药对大鼠皮肤微环境影响 　　摘要：目的：从调节局部免疫、影响黑素细胞黑素合成和迁移3个方面研究外用中药对大鼠皮肤的作用。方法：用中药乙醇提取液外涂大鼠背部皮肤，3周后活检取材，用半定量RT―PCR检测酪氨酸酶(tyrosinase，TYR)、干细胞生长因子(stem cell factor，SCF)、干细胞生长因子受体(stem cell factor receptor，c-KIT)、白介素-2(intedeukine-2，IL-2)和肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor―a，TNF―a)tuRNA的含量。结果：中药3、5、6、7外用后，大鼠皮肤中scF mRNA表达显著增加，分别为对照组的2.59倍、5.82倍、2.60倍和3.74倍(P 　　 　　关键词：白癜风；中药；皮肤；微环境；大鼠 　　中图分类号：B275.984.1；R-33　文献标识码：A　文章编号：1673―7717(2007)11-2362-03 　　白癜风的发病机理不清，尚无令人满意的治疗手段…。国内使用中药外搽在临床上取得较好的效果，然而对于中药引起白癜风复色的机制研究尚在摸索阶段，目前主要着眼于中药对黑素细胞的直接作用。在表皮中，角质形成细胞与黑素细胞密切联系构成“表皮黑素单位”并可通过分泌多种细胞因子影响黑素细胞的生物学性状；大量证据提示白癜风患者黑素细胞周围微环境存在异常，皮损区SCF、GM―CSF和bFGF等表皮促进因子表达显著降低，TNF―a和IL一6等表皮抑制因子表达则显著升高，而近年来用他克莫司进行局部免疫调节治疗白癜风取得了令人瞩目的效果；因此也不应忽视中药通过作用于皮肤中其他细胞从而间接干预黑素细胞的可能。在本文中，笔者研究了治疗白癜风有效的中药外用后对大鼠皮肤局部微环境尤其是角质形成细胞分泌的细胞因子的影响，现报道如下。 　　 　　1 实验材料 　　 　　1.1　实验动物 　　健康雄性SD大鼠3只(浙江中医药大学实验动物中心提供，普通级)，体重420～450g。每只大鼠背部取8个相离的区域，分别外涂药物，并以75％乙醇作对照，每天2次，连续3周。每日涂药前剃毛1次，3周后组织活检取材，进行总RNA提取。 　　 　　1.2　中药 　　中药1：透骨草和浮萍各等份；中药2：白芷、蛇床子和补骨脂各等份；中药3：菟丝子；中药4：刺蒺藜；中药5：女贞子；中药6：维阿露(主要成份为驱虫斑鸠菊、补???脂、何首乌、当归、防风等)；中药7：除白灵酊(主要成份为潼蒺藜、当归、红花等)。以上中药由杭州市第三人民医院中药房提供。用75％乙醇室温下密闭浸泡2周，并不时振荡。滤过除渣，收集提取液，制成每毫升相当于0.1g原生药的溶液。维阿露由新疆新时代制药有限责任公司生产，除白灵酊由本院制剂室生产。 　　 　　1.3　试剂与仪器 　　Trizol(Invltrogen公司)，M-MLV逆转录酶、RNasin抑制剂、Taq DNA聚合酶、dNTPs(Fromega公司)。SmartSpec 3000紫外可见光分光光度计、PCR热循环仪、电泳图象分析仪(Bio―Rad公司)，低温离心机(Herae―us公司)，电泳仪(杭州博日科技有限公司)。 　　 　　2　方法 　　 　　2.1　引物 　　大鼠特异性引物由上海生工生物技术服务有限公司合成，β一肌动蛋白(β―actin)的一对引物序列为：5’-CATCTATGAGGGTrACGCG-3’和5’-CCAGGAT-AGAC.CCACCAAT-3’(产物长度548bp)；SCF的一对引物序列为：5’-GTCTACACCTGAGATCGC-3’和5’-AGACT-CACTACGCTrGAGAG-3’(产物长度374 bp)；干细胞生长因子受体(c-KIT)的一对引物序列为：5’-AGTGGAT-GACCTC GTGGC-3’和5’-GTATrACTGCTACTGCTGTC-3’(产物长度285bp)；酪氨酸酶(TYR)的一对引物序列为：5’-CCAATGCACCATCTGGACCT-3’和5’－CATGACATAGACTGAGCTGA-3’(产物长度272bp)；白介素-2(IL-2)的一对引物序列为：5’-CAGCTCGCATCCTGTGTIV,-CAC-3’和5’-GCTITGACAGATGGCTATCCA TC-3’(432bp)；TNF―a的一对引物序列为：5’-CGCATlTC?CAGTGTGTGGACTG-3’和5’-TGACAGGAGCTGAATC－CCTAC－3’(产物长度347bp)。 　　 　　2.2　提取总RNA 　　按照Trizol说明书进行操作。用紫外分光光度计测定总RNA浓度，A260nm／A280nm为1.7