益气活血方对急性心肌缺血大鼠模型MMP-9及TIMP-1表达影响.docVIP

益气活血方对急性心肌缺血大鼠模型MMP-9及TIMP-1表达影响 　　摘要：目的 观察益气活血方对急性心肌缺血大鼠模型基质金属蛋白酶-9(MMIP-9)及基质金属蛋白酶特异?抑制物-1(TIMP-1)表达的影响。方法 应用结扎冠状动脉左前降支方法建立Wistar大鼠急性心肌缺血模型，运用HE染色观察其病理改变，同时以ELISA法和SP免疫组化法检测血清TIMP-1含量及心肌组织中MMP-9的阳性表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠出现显著的心肌缺血损伤的病理形态；与模型组比较，各药物干预组均可增加心肌缺血后大鼠血清TIMP-1含量(P＜0.05)，中药高剂量组血清FIMP-1含量显著高于低剂量组和阳性对照组(p＜0.01)；与模型组比较，各药物干预组大鼠心组织织中MMP-9表达较有明显降低(P＜0.01)。结论 益气活血方对大鼠缺血心肌有显著的保护作用，其作用机制可能与影响TIMP-l及MMP-9的表达有关。 　　关键词：益气活血方；急性心肌缺血；基质金属蛋白酶-9；基质金属蛋白酶特异性抑制物-1 　　中图分类号：R542.2　R289.5　文献标识码：A　文章编号：1672-1349(2007)12-1216-03 　　 　　急性心肌梗死(AMI)是严重危害人类健康的因素之一，其病理改变涉及诸多因素。目前大量研究已证实基质金属蛋白酶族(mamx metauoprotelnase，MMPs)及其特异性抑制物(TIMPs)在AMI的发生发展过程中起着十分重要的作用。本实验通过建立Wistar大鼠急性心肌缺血模型，来研究中药益气活血方对基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶特异性抑制物-1(tISSUC inhibltor OF matrix metallloproteinase-l，TIMP-1)表达的影响，初步探时其作用机制，为寻求中医药治疗AMI有效方法提供实验依据。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1．1 实验动物 健康清洁级雄性Wistar大鼠100只，体重180g±10g，由北京维通利华实验动物技术公司提供。 　　 　　1．2 实验药品、试剂 ①益气活血方由黄芪、党参、五味子、川芎、赤芍、丹参等药物组成。中药经水提取，制成浸膏，用时以蒸馏水稀释，制成每毫升含4g生药的悬液备用。②阳性对照药：酒石酸美托洛尔，配成0.46mg/mL溶液。由阿斯利康制药有限公司提供，批号：0707012。③试剂盒：大鼠TIMP-1定量EI，ISA试剂盒购自于上海森雄科技实业有限公司；兔抗鼠MMP-9单抗、SP???剂盒及DAB显色剂购自于北京中山生物技术有限公司；其余试剂均为国产分析纯。 　　 　　1．3 动物模型制作与分组 100只大鼠随机分为5组：假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、阳性对照组，各20例。AMI模型建立方法如下：在肺动脉圆锥与左心耳交界处下(1～2)mm用无创手术线结扎左冠状动脉前降支，以结扎部位下心肌组织变白和体表心电图肢体Ⅱ导联出现，ST段弓背向上抬高，持续30 mtn以上作为模型成功的标志。假手术组大鼠以只穿线不结扎。各组大鼠于造模后，治药饲养7d，假手术组和模型组给予蒸馏水16g/(k8?d)；中药高剂量组给予益气活血方16g/(ks?d)；中药低剂量组给予益气活血方8g(kg?d)；阳性对照组给予酒石酸美托洛尔0.96mg/(kg?d)。以上剂量均按成人海日服用量换算。 　　 　　1．4 检测指标 光镜观察心肌组织的病理改变，免疫组化检测MMP-9，ELISA检测TIMP-1含量。 　　 　　1．5 统计学处理 数据以均数±标准差(x±s)表示，应用SPSS 13.0统计软件对其进行统计分析。计量资料应用t检验，两两比较应用q检验。 　　 　　2 结 果 　　 　　2．1 各组大鼠心肌组织病理形态改变 模型组和各用药组左冠状动脉结扎后形成左室游离壁及心尖部的透壁性心肌梗死；模型组心肌组织HE染色显示梗死区心肌纤维溶解断裂，大量炎性细胞浸润，间质纤维化明显；假手术组无心肌梗死发生，表现为心肌细胞排列整齐，基本无炎性细胞浸润和间质纤维化；各用药组心肌组织表现出不同程度的心肌纤维排列紊乱、炎性细胞浸润和间质纤维化。 　　 　　2．2 各组大鼠心肌组织MMP-9及血清了IMP-1检测结果 在假手术组大鼠的心肌组织中MMP-9少见，阳性表达或不表达；模型组大鼠心肌组织中MMP-9表达较假手术组明显升高(P＜0.01)；各药物干预组心肌组织中MMP-9的表达较模型组显著降低(P＜0.01)。与模型组比较，各药物千预组均叮增加AMI后大鼠血清了IMP-1含量(P＜0.05)，中药高剂量组血清TIMP-1含量显著高于低剂量组和阳性对照组(p＜0.01)。