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运动对长骨生长板中PTHrP表达状况影响 　　作者简介：罗冬梅(1961-)，女，黑龙江哈尔滨人，教授，博士，研究方向运动人体生物科学。 　　摘要：为了探讨运动对长骨发育的作用机理，采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术，对100只生长期大鼠经3周、6周和9周的高、低负荷跑台训练后胫骨生长板中局部调节因子甲状旁腺素相关蛋白(PTHrP)的表达进行了观察。结果表明：3周的跑台运动没有显著改变生长板中PTHrPmRNA的表达水平，而6周和9周运动后PTHrPmRNA的表达水平显著高于对照组，低负荷运动组亦显著高于高负荷运动组(p＜0．01或0．05)；各组间对照组PTHrPmRNA的表达水平均未出现显著的增龄变化。结果提示：运动可以通过改变PTHrP的表达水平来调节生长板软骨细胞的活动，进而影响生长板的高度，调节长骨的纵向生长，但其具体的调节途径尚有待进一步研究探讨。 　　关键词：运动；生长板(骺板)；纵向生长；PTHrP 　　中???分类号：G804．21　文献标识码：A　文章编号：1007-3612(2006)05-0626-03 　　在儿童少年生长发育过程中，骨发育占有着十分重要的地位。生长板(骺板)是长骨纵向生长的主导部位。生长板中各层软骨细胞的增殖与分化决定了生长板的高度和骨的长度[1]。生长板软骨细胞活性状态的改变是受多种因素调节的，其中局部调节因子――甲状旁腺素相关蛋白(ParathyriodHormone－RelatedProtein，PTHrP)对软骨细胞的调节具有重要作用。已有大量的研究指出PTHrP在各种种属的发育和成熟的组织中表达非常广泛[2]，其可对钙磷代谢、骨的矿化和细胞的生长与分化等许多方面发挥生物学作用，且主要通过旁分泌和自分泌途径进行调节。迄今为止，尚未见到有关运动或其他机械负荷对PTHrP影响的文献报道。据此，本文将采用动物实验探讨不同强度的运动对长骨生长板中PTHrP表达状况的影响，以期从纵向生长角度揭示运动影响长骨发育的作用机理，并为骨发育状况的评价与干预措施的选择等提供理论依据。 　　 　　1　实验材料与方法 　　 　　1．1　实验材料　选用Sprague-Dawley纯系雄性大鼠100只，4周龄，北京维通利华实验动物技术有限公司提供。国家标准啮齿类动物干燥饲料喂养，自由进食饮水，动物室内温度22±2℃，湿度为40％～60％。所有大鼠均在相同的环境下饲养。 　　1．2　实验动物分组与处置方法　将100只大鼠随机分为：基础对照组(BC)、组间对照组(CON)、低负荷运动组(LE)和高负荷运动组(HE)，在高、低负荷运动组中又分为运动3周组、6周组和9周组，总计10组，每组10只。基础和组间对照组大鼠不做任何特殊处置。运动组大鼠进行跑台训练，根据Bed-ford[3]的研究确定运动负荷，低负荷运动组跑速为12m/min，高负荷运动组跑速为20m／min，二者跑台坡度均为5°。整个运动期为9周，3周为一个训练阶段，分3周、6周和9周3个阶段。运动频度为每周5d，运动时间为每天60min。 　　基础对照组在各组开始处置前1d宰杀取材，3周、6周和9周各组均在各自处置结束后2h内取材。剥取左侧胫骨后，迅速在于骺端分离骨骺，并切除骺部关节面软骨和骨，获得胫骨的生长板，立即置液氮中保存，而后移至-80℃低温冻存，以备各组同批进行PTHrPmRNA测定。 　1．3　定量RT-PCR分析 　　1．3．1　总RNA提取　取100 mg胫骨生长板样品，在液氮当中研磨，研成粉末。加入2000υL裂解液，充分振荡，使沉淀完全溶解后离心。用氯仿和异丙醇进行抽提后，测OD值计算RNA含量。RNA电泳，紫外灯下可清晰可见18S，28SRNA带。 　　1．3．2　cDNA合成和PCR扩增　按常规方法合成cDNA。PTHrP的引物序列为：5’AAAGCCAAGAGAAACGGTGGGCAT　3’，5’GCCAATCATGTGCACCAGTYCCTI3’，扩增片段为400bp。内参照β-actin的引物序列：5’CATCTCTYGCTCGAAGTC 3’，5’ATCATGTITGAGACCTFCAACA 3’，扩增片段为308bp。取15υLPER扩增产物于1．5％琼脂糖凝胶进行电泳，紫外灯下拍照，记录结果，并用GelPr03．0软件分析结果，得到PTHrP与β-actin基因的灰度值比值。 　　1．4　数据统计处理　实验数据用SPSS10．0软件进行统计处理，测量结果均以平均数±标准差(Mean±SD)表示，采用ANOVA进行各组间的方差分析和差异显著性检验，显著性水平为p＜0．05。 　　 　　2　结果 　　 　　2．1　生长板中PTHrPmRNA表达的纵向变化规律　胫骨生长板中P