微生物基因工程PPT.ppt

微生物基因工程;参考资料;1 概述;微生物学;发展概况;他的学生陆续发现白喉，肺炎、破伤风、鼠疫等的病原细；;--1860年，英国外科医生利斯特应用药物杀菌，并创立了无菌的外科手术操作方法。;1892年，俄国植物生理学家伊万诺夫斯基发现烟草花叶病原体是比细菌还小的、能通过细菌过滤器的，光学显微镜不能窥测的生物，称之为过滤性病毒。;生物化学阶段;分子生物学阶段;近年来，原核微生物基因重组的研究不断获得进展，现代微生物学的研究将继续向分子水平深入，向生产的深度和广度发展;微生物作用;1.2 微生物与基因工程;微生物参与基因工程的每个环节;动植物基因工程穿梭载体构建在大肠杆菌中完成外源基因或重组体DNA的拼接和改造。 大肠杆菌表达系统、酵母菌表达系统和哺乳动物细胞表达系统都是采用重组细胞通过微生物发酵罐的方式大量生产目的蛋白。;基因工程推动了微生物学的发展;研究的主要内容;微生物基因的应用前景;微生物基因工程与医药卫生;基因工程与农牧业、食品工业;基因工程与环境保护;2 微生物的遗传物质 ;2.1证实遗传物质是DNA的经典实验;Figure 2.1.1 转化的本质是 DNA. ;Figure 2.1.2 The genetic material of phage T2 is DNA. ;Figurer right:Eukaryotic cells can acquire a new phenotype as the result of transfection by added DNA. ;2 .2 DNA的结构和复制 ;DNA的结构;DNA 双螺旋结构;多核苷酸链反向平行排列;RNA结构;RNA种类;原核生物与真核细胞的染色体;DNA的复制;DNA复制的过程;DNA复制;2.4 基因结构和基因组 +*-;一个典型的真核基因包括： ①编码序列：外显子(exon) ②插入外显子之间的非编码序列--内合子(intron) ③5-端和3-端非翻译区(UTR) ④调控序列(可位于上述三种序列中);2.4.2基因组(genome);原核生物基因组;原核生物基因组;大肠杆菌基因组 ;大肠杆菌基因密码子的使用频率和真核基因中密码子的使用频率不同。如外源真核基因富含大肠杆菌罕用密码子，则很难在大肠杆菌细胞中得到有效表达。 有两种策略可使外源基因上的密码子在大肠杆菌细胞中获得最佳表达： （1）更换同义密码子法。 （2）外源基因和相关tRNA同步克隆法;ФX174噬菌体的基因组 ;真核生物基因组;真核生物基因组;Types of repeat;卫??DNA (Satellite DNA);;三、基因家族(gene family);基因家族的特点：;基因家族分类;;珠蛋白基因;超基因家族(Supergene family);;3 微生物遗传与基因工程;3.1 质粒和转座因子 ;质粒的分子结构 ;质粒的遗传学类型;质粒DNA的特性;基因突变与修复; 从对遗传信息的改变可分为: ;按其发生的原因:1)自发突变（spontaneous mutation）：在自然情况下发生的突变。 2)诱发突变（induced mutation）：人们有意识地利用物理、化学诱变因素引起的突变 。;①随机性：可发生在体细胞和生殖细胞中。生殖细胞 的突变频率高于体细胞。体细胞突变在显性或纯合状 态才能表现，出现嵌合体。;③可逆性1) 野生型基因 。 2) 回复突变率一般低于正突变率。3) 真正的回复突变很少发生。常被第二个位点的突变所抑制，抑制因子突变（suppressor mutation）。4)回复突变的有无是区别基因突变与染色体缺失或重复的标志。 ;如. 5-BU是胸腺嘧啶(T)的结构类似物，酮式结构易与A配对；烯醇式结构易与G配对。;2-AP是腺嘌呤的类似物，既可与T配对，也可与C配对。;（2）嵌入剂： 如： 吖啶橙、吖啶黄素、原黄素等碱基对的类似物，易造成移码突变。;（1）紫外线：产生环丁烷嘧啶二聚体和6-4光产物。 ①双链间形成，阻碍DNA的复制。 ②同一链上相邻T间形成，阻碍碱基的正常配对和 腺嘌呤的正常掺入，使复制在这个点上停止或错 误进行，产生碱基顺序改变了的新链。;基因的定点突变;自发突变的机制 1 DNA复制错误(errors of DNA replication) a 转换 b 颠换;C 移码突变：增加或减少一个或几个碱基对的突变，引起密码编组的移动。如：Hb Wayne是138位UCC失去一个C，使α链的合成不在原来应该终止的地方停止，一直到146位合成精氨酸后才终止，从而使α链延长。 d 缺失和重复突变　 e 插入突变