磷酸化 2011 硕士PPT.pptVIP

;;蛋白质磷酸化与非磷酸化;根据是否有调节物来分又可分成两大类：? 信使依赖性蛋白质激酶（messenger-dependent protein kinase），包括胞内第二信使或调节因子依赖性蛋白激酶及激素（生长因子）依赖性激酶两个亚类；非信使依赖型蛋白激酶。 ;;;;;1、Ser/Thr蛋白激酶 蛋白磷酸化是蛋白激酶将磷酸基因转移到特定底物蛋白上的共价修饰过程，调控蛋白质的酶学活性或生物学功能。分为: ①cAMP依赖的PK ②Ca2+/磷脂依赖的PK ③ Ca2+/ （CaM）钙调蛋白依赖的PK ④cGMP依赖的PK ⑤近年发现新成员——DNA依赖的PK ⑴cAMP依赖的蛋白激酶（ cAMP dependent protein kinase.APK） cAMP-依赖蛋白激酶是一种四聚蛋白酶，含有两个调控亚基和两个催化亚基。当cAMP-依赖蛋白激酶的调控亚基结合时，激酶解离成两个具有催化活性的蛋白激酶（由催化亚基形成）和一个二聚的调控亚基。  cAMP-依赖蛋白激酶被活化后，它解离出来的活性蛋白酶能够催化ATP分子与目标代谢酶分子的磷酸化反应。一般是代谢酶的Ser或Thr残基的羟基被ATP磷酸化，其结果是代谢酶被抑制或激活。磷酸化代谢酶可在蛋白磷酸酶作用下去磷酸化而激活或失活。cAMP即是通过上述机制实现对代谢酶活性的调控。 ;结构与功能 2个调节亚基（R）+2个催化亚基（C）→APK全酶复合体（R2C2）（无cAMP时，无活性） cAMP与特异R亚基结合→构象变化→ R亚基二聚体+2个有活性C亚基,各种哺乳动物细胞于不同水平表达3种C亚基亚型(CαCβCγ)和4种R亚基亚型(RⅠ α RⅠ β RⅡ α RⅡ β) →结合成全酶APK Ⅰ型和 Ⅱ型.不同R亚基亚型主要区别: RⅠ―Mg2+/ATP高亲和位点 RⅡ―自身磷酸化 ;细胞分布与移位RⅠ亚型主要位于胞浆、神经组织中，RⅡ亚型分布于浆膜、细胞骨架成分、树突、分泌颗粒和核膜，是R Ⅱ作用于特定的锚定蛋白所致底物多巴胺和cAMP调节的磷蛋白（dopamine and adenosine-3, 5-monophosphate regulated phosphoprotein DARPP-32）是PKA的有效底物，存在于具有D1多巴胺受体的神经细胞胞浆中。;;2、DAG作用：激活蛋白激酶C,将存在于靶蛋白质中得丝氨酸和苏氨酸残基磷酸化， 改变靶蛋白质的活性。如:糖原合成酶???酸化后，停止合成糖原。 3、DAG与IP3的协调作用　　　IP3－ →细胞质中Ca2 + ↑－→ 糖原合成酶活性↑　　　蛋白激酶C－ →使IP3 诱导增高糖原磷酸化酶活性的过程终止。　 4、DAG的激活机理 　　　DAG－→ 增加蛋白激酶C对Ca2 + +的亲合性－→　在Ca2 +生理水平上被活化。蛋白激酶C为 77kd , 催化区抑制调节区,当DAG结合到蛋白激酶C上，解除酶的调节区的抑制作用，使酶发挥催化活性。;;　研究发现 －→当Ca （二价正离子）结合到E螺旋区和F螺旋区之间的泡区时，引起每个螺旋在它的轴线附近旋转并改变其所在的位置 －→使CaM转变成为一种对靶蛋白质具很高亲和性的构象 CaM只有在结合Ca （二价正离子）形成CaM·Ca（二价正离子）复合物才具生物活性。以两种方式调节代谢：　　a. 直接与靶酶作用 ；　　b. 活化依赖于CaM·Ca（二价正离子）的蛋白激酶 ;;CaM的一级结构在进化上有很强的保守性　a、 同真核生物CaM呈现免疫交叉反应　b、 CaM结构若突变， 容易致死。保守性 CaM二级结构是两个类似的球状叶片通过一段肽链的 连接 而组成整个的分子　a、 每一个球叶中含两个Ca2+结合位点，每个结合位点--12个AA残基，腔式结构，半径0.1nm, 两旁 连接两条相互垂直的а-螺旋--有8个AA残基,组成EF手图像，两个EF 手单位间相距1.1nm b、 在一个球叶中，两个Ca2+结合位点对Ca2+有很高亲和性,在另一个球叶中的位点则亲和性较低 CaM的生理功能　　a、 调节环式核苷酸代谢　　b、 调节Ca2+代谢　　c、 细胞运动，收缩体系与细胞形状　　d、 糖质的代谢　　e、 细胞分裂与核酸代谢　　f、 神经递质的合成与释放　　g、 前列腺素与磷脂代谢　　h、 调节植物细胞代谢　　i、 CaM是细胞代谢调控的综合剂;IV、cGMP依赖的蛋白激酶 (cGMP dependent protein kin