气相色谱方法开发.pptVIP

方法开发的一般步骤 （一）样品来源及预处理方法 气相色谱直接分析的样品必须是气体或液体，固体必须溶解到适当的溶剂中，且不能含有GC不能分析的组分（如无机盐）或可能会损坏色谱柱的组分。 溶剂：沸点低，尽可能避免使用水、二氯甲烷和甲醇。 毛细管柱分析，通常浓度为mg/mL或更低 文献调研很重要。 （二）确定仪器配置 进样装置 载气类型 色谱柱 检测器 如GC分析啤酒中的挥发性组分:。 测定水中痕量含氯农药： 色谱柱的选择：一般“相似相容”原理 分离脂肪烃类： 分离醇类和脂类： 分离农药残留： （三）确定初始操作条件 包括进样量、进样口温度、检测器温度、色谱柱温度和载气流速 进样量：样品浓度、色谱柱容量、检测器灵敏度来确定 进样口温度：主要由样品的沸点范围决定，还要考虑色谱柱的使用温度。一般要接近沸点最高的组分的沸点，但要低于易分解组分的分解温度。一般250-3500C之间。 色谱柱的温度：由样品的复杂程度和汽化温度决定。原则：保证待测物的完全分离，还要保证所有组分能流出色谱柱、且分析时间越短越好。 程序升温：色谱柱的初始温度接近于样品中最轻组分的沸点，而最终温度取决于最重组分的沸点。升温速率根据样品的复杂程度而定。 建议,毛细管柱的尝试温度设置为： OV-1（SE-30）柱：50-2800C，升温速率100C/min OV-17（ OV-1701)柱： 60-2600C，升温速率80C/min PEG-20M柱： 60-2000C，升温速率80C/min 检测器的温度：保证流出组分不会冷凝，同时满足检测器灵敏度的要求。 载气的流速：按照比最佳流速（氮气：20cm/s;；氦气： 20cm/s;氢气：30cm/s）高10%来设置，再根据分离情况调节。 FID 燃气/助燃气 空气：300-400mL/min;氢气，30-40mL/min；氮气（尾吹气）： 30-40mL/min （四）分离条件的优化 在最短的时间内达到符合要求的分离结果。 主要是改变柱温和载气流速。 在初始条件最难分离物质对的分离度大于1.5时可采取的措施： 如果改变柱温和载气流速达不到基线分离的结果，可更换更长的色谱柱，甚至更换不同固定相的色谱柱。 （五）定性鉴定 一般是通过标准物质对照来定性。双柱定性和多柱定性比较可靠，GC-MS是首选方法。 （六）定量分析 理论上浓度型检测器用峰高定量较准确，质量型检测器用峰面积定量较准确。峰未完全分离时，峰高定量是合理的选择。 二、方法的验证 方法验证(validation,又称认证）：证明所开发方法的实用性和可靠性）。 实用性：一般指所用仪器配置是否全部可作为商品购得；样品处理方法是否简单易操作，分析时间是否合理，分析成本是否被同行接受等。 可靠性：定量的线性范围、检测限、方法回收率、重复性、重现性和准确度等。 1.方法的线性范围 当相关系数大于0.99，可认为是线性的 一个好的GC定量方法，线性相关系数等于或大于0.999. 2.方法的检测限 检测限（DL）：指方法可检测到的最小样品量（浓度）。一般原则是当样品组分的响应值等于基线噪声的3倍时，该样品的浓度作为最小检出限。还将10倍信噪比所对应的浓度叫做最小定量限。 3.方法回收率 方法测得的样品浓度与原来样品中实际浓度的比率。如果样品未进行任何预处理，则回收率一般可以不考虑。 4.方法重复性和重现性 重现性（reproducibility）：同一方法在不同时间、地点、不同型号 仪器、不同操作人员使用时所得结果的一致性。 重复性（repeatability）：同一个人在同一台仪器上重复进样所得结果的一致性。 重复性，在相同条件下，一般要求保留实验的RSD小于1%，峰面积的RSD小于5%。 方法的重现性包括多次连续进样分析的重复性、不同时间（天与天之间）分析的重复性、不同仪器型号之间的重现性和不同实验室之间的重现性。 方法开发人员首先应重视重复性：在相同条件下连续进样5-10次，统计待测组分的保留时间和峰面积（或峰高）的RSD,一般要求保留时间的RSD不大于1%，峰面积的RSD不大于5%。 如果样品要经过预处理，还应测定同一样品多次处理的重复性。即取同一样品取3-5氛做平行处理，看最好测定结果的重复性。这一RSD应不大于5%。有些工业分析RSD应不大于10% * 样品及其来源 文献调研 样品预处理 仪器配置 样品溶液 确定初始条件 样品尝试分离 优化分离 定性鉴定 分离结果是否满意 定量方法 方法验证 线性范围 检测限 回收率 重复性 再现性 准确度 不满意 *