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葡萄组织培养中愈伤组织诱导 　　摘要：采用三因素（萘乙酸ＮＡＡ，吲哚丁酸ＩＢＡ，６－苄氨基嘌呤６－ＢＡ）四水平的正交试验设计，对“鄞红”葡萄近梢处的嫩茎段和幼果进行愈伤组织诱导试验。结果表明，６－ＢＡ对愈伤组织诱导影响最大。以嫩茎段为外植体的最佳培养基配方是ＭＳ＋1．00 ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．１0 ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０.20 ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ，其诱导率为７０．００％。以幼果为外植体的最佳培养基配方是ＭＳ＋０．８0 ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．１0 ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．２0 ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ，诱导率为６１．８５％。嫩茎段是“鄞红”葡萄愈伤组织诱导最理想的外植体。 　　关键词：葡萄；嫩茎；幼果；愈伤组织诱导；正交设计 　　中图分类号：Ｓ６６３．１；Ｑ８１３．１＋２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）04－0827-03 　　葡萄是多年生落叶藤本浆果类果树，属葡萄科（Ｖｉｔａｃｅａｃｅ）葡萄属（Ｖｉｔｉｓ Ｌ．）植物［１］。其常规栽培繁殖方法为扦插和嫁接，长期采用导致葡萄品种退化，病害感染率高，严重影响果实产量和品质［２，３］，而组织培养可以达到缩短育种周期、减轻病害和快速繁殖的目的［４］。葡萄叶片和叶柄再生比较困难［１］。李云等［５］对“红地球”葡萄叶片及叶柄进行不定芽诱导，石雪晖［６］对藤稔葡萄叶片、茎段、叶柄和卷须进行离体培养，其诱导率和不定芽分化率均不高。试验所选材料为“鄞红”葡萄，属欧美杂种（Ｖ． ｖｉｎｉｆｅｒａ Ｌ．×Ｖ． ｌａｂｒｕｓｃａ Ｌ．），在浙江省栽培范围较广，目前还鲜有关于此品种的组织培养研究报道。通过采用正交试验设计，筛选葡萄愈伤组织诱导的最佳激素浓度配比，以期为该葡萄品种的组织培养和快速繁殖提供有效途径和方法。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　材料取自宁波市江北绿艳果蔬专业合作社葡萄试验基地，以“鄞红”葡萄的嫩茎段与幼果作为外植体。 　　１．２方法 　　１．２．１外植体消毒先用自来水洗去外植体表面残留物质，在洗洁精中浸泡１０ ｍｉｎ，再用自来水充分清洗，并用无菌水洗涤一次。然后在体积分数???７０％的乙醇溶液中浸泡４０ ｓ，用无菌水冲洗２～３次，再用1 g/L的HgCl2对外植体处理７ ｍｉｎ，并用无菌水洗涤５～６次。将消毒处理的外植体放在事先灭好菌的滤纸上吸干表面水分，把消过毒的伤口剪掉，然后接种于培养瓶中。 　　１．２．２试验设计与培养条件于２００９年５月１６日对“鄞红”葡萄近梢处的嫩茎段和幼果进行愈伤组织诱导试验。以ＭＳ为基本培养基，附加２０ ｇ／Ｌ蔗糖，７ ｇ／Ｌ琼脂，ｐＨ为５．８～６．０。采取三因素（萘乙酸ＮＡＡ，吲哚丁酸ＩＢＡ，６－苄氨基嘌呤６－ＢＡ）四水平的正交试验，即Ｌ１６（４３）正交设计（表１），进行愈伤组织诱导试验。每个处理接种２０瓶，每瓶６个外植体，重复３次。培养条件为温度２５ ℃，光照时间１２ ｈ／ｄ，光照度２ ０００ ｌｘ，培养７周。 　　１．２．３统计方法接种后，每隔５～７ ｄ观察记录愈伤组织的生长状况，至２００９年７月１５日统计愈伤组织的诱导率、颜色和质量。数据处理使用ＤＰＳ系统软件对试验结果进行方差分析和显著性检验［７］。 　　２结果与分析 　　２．１不同激素配比对嫩茎段愈伤组织诱导的影响 　　６－ＢＡ、ＮＡＡ、ＩＢＡ对嫩茎段愈伤组织诱导影响的试验结果见表２。１６个处理中，Ｋ处理（ＭＳ＋１．００ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．１０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．２０ ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ）的愈伤组织诱导率最高，达到７０．００％。愈伤组织呈棕黄色，诱导速度比较快，且质量致密（图1）。其次为Ｈ处理（ＭＳ＋０．８０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．２０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ），诱导率达到６１．８８％，愈伤组织呈棕黄色，质量也致密。而Ａ、Ｂ、Ｃ和Ｄ处理没有愈伤组织产生。由表３的方差分析可以看出，６－ＢＡ、ＮＡＡ和ＩＢＡ不同浓度水平对嫩茎段愈伤组织诱导的影响分别达到显著（Ｐ＜０．０５）或极显著（Ｐ＜０．０１）差异。１．００ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ水平下愈伤组织诱导率极显著高于１．５０ ｍｇ／Ｌ水平，但与０．８０ ｍｇ／Ｌ水平无显著性差异，表明６－ＢＡ浓度过高时不利于愈伤组织诱导。ＮＡＡ在０．１０ ｍｇ／Ｌ水平下愈伤组织诱导率最高，达到４４．４２％，极显著高于０．０５ ｍｇ／Ｌ水平和对照0 ｍｇ／Ｌ水平，但与０．２０ ｍｇ／Ｌ水平无显著性差异，表明ＮＡＡ浓度过低时不利于愈伤组织产生。ＩＢＡ在０．２０ ｍｇ／Ｌ或是０ ｍｇ／Ｌ水平下诱导率较高，分别为４４．４２％和４１．１０％，极显著高于０．１０和０．０５ ｍｇ／Ｌ水平。 　　因素内水平极差值的大小能够说明该因素对试验结果的影响程度。经表３计算得知，６－ＢＡ对“鄞红”葡萄近梢处的嫩茎段作用影响是最大的，极差为４７