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大黄多糖组分及结构分析 　　[摘要] 目的 对大黄中多糖成分进行提取、纯化，并对其组分及结构进行分析。 方法 采用超声提取大黄多糖，三氯乙酸脱蛋白， Superdex 200 凝胶色谱纯化多糖，采用气相色谱分析多糖的组分，采用紫外光谱分析多糖结构。 结果 经分离纯化，得到单糖纯品SRPⅠ、SRPⅡ、SRPⅢ，其中SRPⅠ由葡萄糖、半乳糖和木糖组成，SRPⅡ由鼠李糖、葡萄糖、阿拉伯糖和半乳糖组成，SRPⅢ由鼠李糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖及果糖组成，紫外光谱分析发现，大黄多糖中含有β型糖苷键、吡喃糖环、氢键及羟基等结构。 结论 大黄多糖含有多种单糖组分，分子结构较为复杂。 　　[关键词] 大黄；多糖；组分；结构；气相色谱法；紫外光谱法 　　[中图分类号] R284.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2012）32-0093-02 　　大黄是常用的中药材，具有清湿热、泻下等作用，是中医药药典收录的药物之一，现代药理学的研究结果发现，多糖是大黄的有效成分之一[1]，也是大黄提纯、利用的主要药效成分。本文就大黄多糖的提取、纯化及组分进行研究，为大黄多糖药学制剂的研究提供参考依据。 　　1 资料与方法 　　1.1 主要仪器与试剂 　　掌叶大黄（购于甘肃铨水），苯酚、硫酸、丙酮（浙江碧云天生物试剂公司），其它试剂为分析纯，DL-360超声波仪（江苏常州医用设备厂），电子恒温水浴箱（上海精密仪器厂），分析天平（上海精密仪器厂），R-201旋转蒸发器（上海申胜生物技术有限公司）， DZG-6020 型真空干燥箱（苏州江东精密仪器有限公司），D-1 冷冻干燥机、BS-100A 自动部分收集器（郑州科达仪器厂），800 型离心沉淀器（金坛市城西丽华实验仪器厂），R201 旋转蒸发仪（常州诺基仪器有限公司），Jasco FT-IR 410 光谱仪（日本）等。 　　1.2大黄多糖的提取及去蛋白 　　精密称取烘干至恒重的大黄根茎研磨成粉末，烘干至恒重，称取100g，置500 mL烧瓶中，采用石油醚回流脱脂2 h，2次，残渣加水进行超声提取，提取参数设置35kHz，提取后滤去残渣，置于60℃水浴锅中水浴浓缩，活性炭（0.1%）脱色后过滤，滤液采用乙醇脱水，真空干燥，得大黄多糖。干燥后称取10 mg，加入蒸馏水配制成0.5 mg/L大黄多糖溶液??加入1%三氯乙酸沉淀蛋白质，离心过滤，上清液进行醇析、过滤、沉淀、复溶，提取去蛋白多糖。 　　1.3 大黄多糖纯化 　　精密称取大黄多糖3 g，溶解于1000 mL蒸馏水中，配制成3 mg/mL大黄多糖溶液，上 Superdex 200 柱，参数设置：体积4 mL；移动相为超纯水；流率0.5 mL/min，LKB Superfrac fraction收集器收集过滤液（5 mL），Shimadzu RID-10A 折光指数分析器进行分析，合并多糖部分，重复上样，在相同的出峰部分重复收集 5 次，浓缩后合并，蒸发浓缩，用乙醇沉淀，先后用无水乙醇、丙酮洗涤，真空干燥得精多糖。分离得三个纯化组分，分别命名为SRPⅠ、SRPⅡ和SRPⅢ，采用苯酚-硫酸法进行测定，显示峰值对称单峰曲线（图1），得单一纯品多糖。 　　1.4大黄多糖的气相色谱分析 　　精密称取木糖 9.4 mg，甘露糖 10.7 mg，岩藻糖9.8 mg，果糖 10.4 mg，甘露醇 11.2 mg，半乳糖10.9 mg，葡萄糖11.4 mg，鼠李糖 10.2 mg，阿拉伯糖 10.0 mg，分别加入 10 mg 盐酸羟胺和1.0mg内标肌醇六乙酰酯，吡啶1 mL，震荡混匀后90℃水浴30 min，取出冷却后加 2.0 mL醋酸酐， 90℃水浴中酰化 30 min，产物干燥，采用氯仿重新溶解，加样进行气相色谱分析，得标准品色谱图（图2），分析条件：OV1 石英柱子（12 mm×0.30 mm），电子冲击模式：70 eV，温度300℃，分流比1∶45，进样量2 μL。气体流速氮气25 mL/min，精密称取氢气 30 mL/min，SRPⅠ、SRPⅡ和SRPⅢ单糖10 mg，按上述条件操作。 　　1.鼠李糖2.岩藻糖3.阿拉伯糖4.木糖5.甘露糖6.葡萄糖7.半乳糖8.甘露醇9.果糖 　　1.5 大黄红外光谱分析 　　使用溴化钾（1/10 mg）压片法分析大黄多糖的红外光谱，波长范围（4 000～400） cm-1，观察谱峰情况。 　　2 结果 　　2.1 大黄多糖的组分 　　SRPⅠ、SRPⅡ和SRPⅢ单糖分析结果显示，SRPⅠ由葡萄糖、半乳糖和木糖组成，SRPⅡ由鼠李糖、葡萄糖、阿拉伯糖和半乳糖组成，SRPⅢ由鼠李糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖及果糖组成。 　　2.2 大黄多糖的分子结构 　　光谱分析结果显示（图3），大黄多糖的吸收光谱