免疫学原理与技术答辩PPT.pptxVIP

靶向Del-1蛋白的肿瘤血管阻断剂与新生血管抑制剂双效抗体药物的制备;编辑标题;;;1.1 选题背景;1.Del-1促肿瘤血管生成作用;结合αvβ3;1.3 研究意义;;2.1 理论依据;思路;DEL-1蛋白的3D构型;2.2.1 Del-1相关情况;Del-1蛋白的序列展示;Del-1蛋白中EGF-2的结构域放大;实验所用具体材料;材料; 采用盐析法提纯单克隆抗体，对A-J分别执行如下操作，调节样品pH值，加入正辛酸（25ul/l），搅拌30min；室温高速离心（10000g，30min），收集上清液；再加入硫酸铵（40%饱和度）；4℃高速离心（10000g，15min），弃去上清液；用PBS溶解沉淀，可得到比较纯的单克隆抗体A-J溶液。;一、假设小分子抗体与凝血酶原能够结合; 酶免疫技术法（ELISA）： （1）将单位量Del-1蛋白吸附于固相载体上，洗涤，封阻。 （2）用辣根过氧化物酶（HRP）根据过碘酸盐氧化交联法进行抗体标记,将酶标抗体加入孔内。 （3）洗涤未反应物。 （4）加入底物（TMB）。 （5）加入浓硫酸终止反应，测OD值，检测显色反应的程度，记录。 （6）加入第二种抗体（单位量），重复前面步骤，直至全部检测完。 （7）根据显色程度大小，将抗体按与Del-1亲和力的大小进行排序。;;;采用流式细胞仪确定抗原—抗体结合表位。然后利用基因拼接技术（基因工程），在融合蛋白作用下，将表位与酶原连接，这样就可保证抗体与酶原结合。;采用脂质体包埋法，将脂质体包埋在酶原上，制成多囊颗粒。增加酶原稳定性。;2.2.5 测小分子抗体的效价、亲和力、特异性;④-70℃保存;①SDS非还原性电泳;2.2.7 临床前研究;2.2.7 临床前研究;2.检查凝血酶是否发挥作用：将小鼠分为给药组和不给药组，每组5只。对两组肿瘤组织进行切片，制成组织匀浆。用凝血酶ELISA检测试剂盒检测两组小鼠肿瘤组织中的凝血四项。（凝血四项包括凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（FIB））;2.3 可行性说明;噬菌体展示技术应用;;应用前景;感谢您的批评指正