酪氨酸的提取及其酶促反应动力学研究.doc

结果分析与讨论: 由上述三组图表可知，Km值是一个特征值，它与酶的浓度无关，在一定的温度和酸度条件下为常数。另外，由图二、三可知，铜试剂和KCl溶液都是多巴的竞争性抑制剂，两者竞争酶的同一个活性中心，如果提高底物浓度可以克服这种竞争性抑制。 查文献可得，KCl的抑制常数10mmol/L，Vmax=0.77。 而实验测得，KCl的抑制常数mol/L，Vmax =0.84。可见，KCl的抑制常数与文献值相差较大，由计算Ki的公式 可知，Vmax 、Km、 k这三个量影响着。其中主要由底物的浓度[S]、酶的活性和吸光度A决定Ki的值的大小。 首先底物是多巴，它需要冷藏保存。然后酶是细胞产生的一种具体催化性能的蛋白质，很容易受高温、酸、碱等的作用而变性，酶变性后即失去活性，所以酶催化作用的环境一般是在体温下，接近中性的介质中进行。冷藏可以使大多数酶的寿命大大地延长，所以本实验所用的土豆和研钵等提取酶的用具，以及磷酸缓冲溶液都必须事先充分冷却，同时提取酶的操作时间亦应尽可能地短。否则会使酶失活，从而影响后面实验测定的经过酶促反应后的溶液吸光度。最后，由A＝abc其中a为吸光系数，单位L/(g·cm)b为液层厚度（通常为比色皿的厚度）单位cm ，c为溶液浓度，单位g/La是与溶质有关的一个常量。此外，温度通过影响c，而影响 由图可看出,酪氨酸酶的最适温度为 ℃。随着温度的升高,酪氨酸酶的活性不断提高,达到最大值后,酶的活性又逐渐降低。当温度达到 ℃,酶的活性直线下降。因此,调节温度特别是低温条件能有效地抑制酶的活性。 由图可知，当溶液中酶的含量增加时，曲线斜率也增加，这表明酶浓度高，其反应活性也高。 铜试剂的对酶活性的影响 如图所示，两直线在Y轴的截距是相同的。且由图可知，铜试剂是多巴的竞争性抑制剂，二者竞争酶的同一个活性中心，如果提高底物的浓度可以克服这种竞争性抑制。由4可知Km=0.011092423，Vmax=0.000084，且由上图知， 当抑制剂浓度为[I]=10mol/L时，斜率 于是得Ki=mol/L KCl对酶活性的影响 由图可知，KCl溶液是多巴的竞争性抑制剂，二者竞争酶的同一个活性中心，如果提高底物的浓度可以克服这种竞争性抑制。由4可知Km=0.011092423，Vmax=0.000084，且由上图知，当抑制剂浓度为[I]=10mol/L时，斜率 于是得 Ki=mol/L ) ] [ 1 ( max ? ? ? Ki I V Km k 1 . 310 ) ] [ 1 ( max ? ? ? ? Ki I V Km k ) ] [ 1 ( 50 Km S Ki IC ? ? 0 . 285. ) ] [ 1 ( max ? ? ? ? Ki I V Km k ) ] [ 1 ( 50 Km S Ki IC ? ?