生物化学之DNA的生物合成PPT.ppt

第三篇 基因信息的传递 ;中心法则;第十章 DNA的生物合成（复制）;第一节 半保留复制;1、Watson和Crick的半保留复制模型： DNA双螺旋的两条链碱基通过A-T、G-C之间的氢键联结，并且两条链互补。因此，Watson和Crick提出DNA的半保留复制模型： 双螺旋揭开，每条链作为模板，以四种脱氧核苷三磷酸（dNTP）为底物，在依赖于DNA的DNA聚合酶催化下，按照A-T、G-C配对方式，合成与两条模板链脱氧核苷酸对应的两条新链，然后以一新一旧脱氧多核苷酸组成的双链分别进入子细胞。 ;（3）DNA用密度梯度平衡离心法进行高速长时间离心，由于15N-DNA的比重大于14N-DNA，在氯化铯溶液中离心时分别处在不同密度的层次中（重在下，轻在上），结果： 0代：两条单链全为重的（处于下层）； 1代：全部为一轻一重的杂合分子（处于上层 和下层之间一个单层，15N-14N ）； 2代：一种是15N-14N，与第1代的一样；另 一种是全部轻的14N-14N。为1∶1； 3代：仍有两种分子，但14N-14N增多，为 1∶3； 4代：两者比为1∶7。;DNA半保留复制的证据;第二节 DNA复制的酶学;DNA聚合酶的活性;一、聚合酶催化的反应;;聚合反应 在DNA聚合酶催化下，四种脱氧核糖核苷三磷酸（dATP、dGTP、dCTP、dTTP）被加到DNA链的3’末端，同时释放出无机焦磷酸。 1、DNA链的游离3’-羟基对进入的dNTP磷原子发生亲核攻击，形成3’,5’-磷酸二酯键，并脱下焦磷酸 2、形成磷酸二酯键的能量来自α-与β-磷酸基之间高能键的裂解 3、聚合反应可逆，但随焦磷酸的水解可推动反应的完成 4、DNA链由5’向3’方向延长 5、需要有游离的3’-羟基，即需要引物链;二、 DAN聚合酶结构;pol Ⅱ： 以带有缺口的双链DNA为模板和引物，从5’→3’方向合成DNA，同时具有3’→5’外切酶活力。 可能在DNA的修复中起作用。 ; pol Ⅲ： 真正起复制作用的酶。由10种亚基组成的不对称二聚体，α、ε、θ组成核心酶活性：聚合活性、3′→ 5′外切活性 α+ε+θ polⅢ（核心酶） polⅢ（核心酶）+τ polⅢ’ polⅢ’+γ+δ polⅢ*（全酶） α具有聚合酶活力，ε具有校对功能，θ是组建核心酶因子，τ是二聚化因子，γ和δ是延长因子，β识别引物并引导聚合酶结合，复制起始时被释放。pol只作用于有缺口的双链DNA，pol’可作用于有引物的长单链DNA，pol*是天然的聚合酶;（二）真核生物（DNA-pol）： DNA聚合酶α：与随从链的合成有关。需要以缺口双链或带引物的单链DNA为模板，引物是DNA或RNA短链，RNA引物由引物合成酶合成 DNA聚合酶β：核酸外切酶活性，与修复有关 DNA聚合酶γ：存在于线粒体。以RNA为模板，以DNA短链为引物 DNA聚合酶δ：与领头链的合成有关。具有3’→5’外切酶活力 DNA聚合酶ε：与校读、修复和填补缺口有关 ;核酸外切酶活性和即时校读 DNA-polⅠ，Ⅱ的3′→ 5′外切酶活性 （主要应用在引物切除后的缺口复制） 复制的保真性和碱基选择 pol Ⅲ 的ε亚基 先形成氢键，再生成磷酸二酯键 依赖三种机理 1 遵守严格的碱基互补配对规律 2 聚合酶在复制延长中对碱基的选择功能 3 复制中出错时有即时校读功能; 三、复制中解链和DNA分子的拓扑学变化;（二）DNA拓扑异构酶（解旋酶） 既能水解，又能连接磷酸二酯键 拓扑酶Ⅰ：切断DNA双链中的一股（原核生物中只能消除负超螺旋，真核生物中能消除正、负超螺旋） 拓扑酶Ⅱ：切断DNA双链（同上） （三）单链DNA结合蛋白（SSB） 维持模板处于单链状态 保护单链的完整 ;四、引物酶和引发体 引物酶：RNA聚合酶 - Dna G 引发体：Dna G 和 DnaB Dna A辨认复制启始点，然后解链酶Dna B在Dna C帮助下结合解链区，并在DNA拓扑异构酶协助下沿DNA链5’ →3’方向解链，并由SSB蛋白保护单链。解链后，在复制起点DnaB活化Dna G，促使其合成RNA引物。;五、 DNA连接酶（ligase）;DNA连接酶 催化双链DNA切口处的5’-磷酸基和3’-羟基生成磷酸二酯键： （1