生物化学教程王镜岩朱圣庚徐长法第17章 蛋白质的生物合成PPT.ppt

* 它有两个主要功能域：一个是存在于N-端的高度保守的ATP酶结构域，能结合和水解ATP；另一个是存在于C-端的肽链结合结构域。蛋白质的折叠需要这两个结构域的相互作用。 大肠杆菌的HSP70 (DnaK) ATP酶 肽链结合结构域 H2N EEVD-COOH Grp E 结合部位 DnaJ/HSP40 结合部位 * 大肠杆菌的HSP40 (Dna J)可激活Dna K中的ATP酶，生成稳定的Dna J -Dna K-ADP-被折叠蛋白质复合物，以利于Dna K发挥分子伴侣作用。在ATP存在的情况下，Dna J和Dna K的相互作用能抑制蛋白质的聚集。 Grp E，核苷酸交换因子，与Dna K的ATP酶结构域结合，使Dna K的构象发生改变、ADP从复合物中释放出来并由ATP代替ADP，从而控制Dna K的ATP酶活性。 在蛋白质的折叠过程中，HSP70还需2个辅助因子HSP40和Grp E。 大肠杆菌中的HSP70 反应循环 HSP70 HSP40 HSP70 HSP40 * 人类细胞中HSP蛋白质家族可存在于胞浆、内质网腔、线粒体、胞核等部位 涉及多种细胞保护功能：如使线粒体和内质网蛋白质保持未折叠状态而转运、跨膜，再折叠成功能构象； 通过类似上述机制，避免或消除蛋白质变性后因疏水基团暴露而发生的不可逆聚集，以利于清除变性或错误折叠的多肽中间物等。 * 伴侣蛋白（chaperonin）是分子伴侣的另一家族，如大肠杆菌的Gro EL和Gro ES（真核细胞中同源物为HSP60和HSP10）等家族。 其主要作用是为非自发性折叠蛋白质提供能折叠形成天然空间构象的微环境。 2. 伴侣蛋白Gro EL和Gro ES 伴侣蛋白的主要作用： 为非自发性折叠蛋白质提供能折叠形成天然空间构象的微环境。 * 原核延长因子 生物功能 对应真核延长因子 EF-Tu 促进氨基酰-tRNA进入A位，结合分解GTP eEF-1-α EF-Ts 调节亚基 eEF-1-βγ EF-G 有转位酶活性，促进mRNA-肽酰-tRNA由A位前移到P位，促进卸载tRNA释放 eEF-2 肽链合成的延长因子 进位/注册 氨基酰-tRNA进入A位。 EF-Tu介导氨基酰-tRNA进入A位。“进位”过程使与之结合的一个GTP水解。 原核生物的肽链延长过程 EF-Ts是EF-Tu的鸟嘌呤核苷酸交换因子，催化与EF-Tu复合的GDP释放并重新形成EF-Tu和EF-Ts的二聚体 (EF-T) Tu Ts GTP GDP A U G 5 3 Tu Ts 成肽 ——由转肽酶（rRNA核酶）催化的肽键形成过程 转位 延长因子EF-G有转位酶活性，可结合并水解GTP提供能量，促进核糖体向mRNA的3端移动。 fMet A U G 5 3 fMet Tu GTP 成肽后A位中的肽酰-tRNA进入核糖体P位，使A位再次空出 进位 转位 成肽 * P A eEF1a/β eEF2 GTP GTP 真核肽链延长： 真核核糖体无E位，合成好的肽链直接从P位脱离 eEF1a/β 分别对应原核EF-Tu/Ts eEF2对应原核EF-G * 在延长过程中，每生成一个肽键，消耗2个GTP；在蛋白质合成过程中，每生成一个肽键，平均需要消耗4个GTP。 （三）终止 当核糖体A位出现mRNA的终止密码后，多肽链合成停止，肽链从肽酰-tRNA中释出，mRNA、核糖体大、小亚基等分离，这些过程称为肽链合成终止。 * 肽链上每增加一个氨基酸残基，就需要经过一次进位、成肽和转位反应。如此往复，直到核糖体的A位对应到了mRNA的终止密码子上。 终止密码子不被任何氨基酰-tRNA识别，只有释放因子RF能识别终止密码子而进入A位，这一识别过程需要水解GTP。 三、终止密码子和释放因子导致肽链合成停止 终止相关的蛋白因子称为释放因子(release factor, RF) 识别终止密码，如RF-1特异识别UAA、UAG；而RF-2可识别UAA、UGA。 而真核eRF识别所有3种终止密码子。 RF-3诱导转肽酶变为酯酶活性，使肽链从核糖体上释放。 释放因子的功能: 原核生物释放因子：RF-1，RF-2，RF-3 真核生物释放因子：eRF U A G 5 3 RF COO- * 多聚核糖体的形成可以使蛋白质生物合成以高速度、高效率进行。 多聚核糖体(polysome) 1条mRNA模板链都可附着10～100个核蛋白体，这些核糖体依次结合起始密码子并沿5?→3?方向读码移动，同时进行肽链合成，这种mRNA与多个核糖体形成的聚合物称为多聚核糖体(polysome) 。 ——使蛋白质合成高速、高效进行。 多聚核糖体(polysome) * 原核生物与真核生物肽链合成过程