第19章药物研究的生物化学基础PPT.ppt

（二）电泳分析法 电泳是带点颗粒在电场作用下，向着与其所带电荷相反的电极方向移动。 各种物质由于所带净电荷的种类和数量不同，因而在电场中的迁移方向和速度不同。利用物质的这种性质可以对物质进行分离和鉴定。 电泳分析法 影响颗粒电泳迁移率的因素主要有： 1. 缓冲液的种类和性质 2. 电场 3. 支持介质 （三）酶法分析 酶法分析的原理是借助酶促反应（包括单酶或多酶耦联反应）对酶或酶所作用的底物或参与酶促反应的辅酶、激动剂和抑制剂等进行定性、定量分析。 酶法分析的特点 酶法分析主要有三类测定法： 1. 终止反应法 2. 连续测定法 3. 循环放大法 二、生物药物质量控制的生化分析法 （一）多肽与蛋白质类药物的主要分析方法 1. 蛋白质药物的纯度分析 蛋白质纯度一般是指样品有无含其他杂蛋白，而不包括盐类、缓冲液离子、SDS等小分子在内。 蛋白质纯度检测方法： 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） SDS毛细管电泳（CE） 等点聚焦（IEF） HPLC（包括凝胶排阻层析，各种反相HPLC， 离子交换色谱，疏水色谱等） 化学法 2. 多肽与蛋白质的分子量的测定 3. 蛋白质的定量测定 4. 生物质谱法 （二）核酸类药物的主要分析方法 核酸、核苷酸及其衍生物的分子中含有碱基，具有共轭双键结构，对紫外光有特征吸收，RNA和DNA对紫外光的特征吸收位于260nm处。 核酸分子中含有碱基、戊糖和磷酸。定量核酸的方法可测定三者中任何一种，从而计算样品中的核酸含量。 每1ml含1μg RNA 溶液的光吸收值为0.022， 每1ml含1μg DNA 溶液的光吸收值为0.020。 1. 紫外分光光度法测定RNA与DNA含量 当RNA与浓盐酸在100℃下煮沸后，即发生降解产生核糖，并进而转变为糠醛，在FeCl3或CuCl2催化下，糠醛与3，5-二羟基甲苯（地衣酚 ）反应生成绿色复合物，在670nm处有最大吸收。 2. 地衣酚显色法测定RNA 3. 二苯胺法测定DNA含量 （三）酶类药物的分析 酶类药物的主要质量指标是它的催化活力。 适宜的测定酶活力的方法至少应满足如下条件： 1. 有可被检测且能反映酶反应进行程度的信号物 2. 底物对酶远远过量 3. 适宜的反应温度 4. 最适的pH反应体系 5. 被测的酶量适当 6. 测定时间在酶促反应初速度范围内。 （四）重组DNA药物中的可能杂质检查 1. 外源性DNA 　　重组DNA药物中残留的外源性DNA来源于宿主细胞，每种制品都有其独特的残留DNA，因此产品中必须控制外源性DNA残留量。 测定残留DNA的有效方法： DNA分子杂交技术。 2. 宿主细胞蛋白质 　　宿主细胞蛋白质简称宿主蛋白，是指生成过程中来自宿主或培养基中的残留蛋白或多肽等杂质。 测定制品中宿主蛋白含量的方法： 酶联免疫吸附测定法（ELISA）； Western blot 法。 ３. 二聚体或多聚体的测定 　　一般采用分子排阻色谱法测定二聚体或多聚体的含量限度。 4. 降解产物的测定 　　鉴于降解产物的基本结构通常与未降解的重组药物相似，因此，对降解产物的测定多采用离子对反相色谱。 第三节 药理学研究的生物化学基础 现代药理学研究已从整体、系统、器官、组织、细胞进入到亚细胞、分子甚至量子水平，因此生物化学和分子生物学已成为现代药理学的重要理论基础。 一、 药物作用的生物化学基础（一）神经传导与神经递质 当两个神经元的突触间隙＜20nm时，动作电位仍可使突触后膜去极化，神经冲动继续向下传递。 如裂隙＞ 20nm时，就必须由神经递质来传递信息。 神经递质(突触分泌信号)：神经元突触前膜释放起着信息传递作用的物质称为神经递质。 （二）受体的结构与功能 细胞中能识别配体并与其特异性结合，引起各种生物效应的分子称为受体。 为蛋白质，部分为糖蛋白或脂蛋白。 受体的化学本质： 1. 受体 —— 离子通道型 受体本身构成离子通道。 当受体的调节部位与配体结合后，受体变构，使通道开放或关闭、引起或切断阳离子、阴离子的流动，从而传递信息。 2. 受体 —— G蛋白-效应蛋白型 在真核细胞，鸟苷三磷酸-结合蛋白（G蛋白）在联系细胞膜受体与效应蛋白质中起着重要的介导作用。 3. 受体 —— 酶偶联型 4. 受体 —— 转录因子型 （五）外源DNA导入受体细胞 受体细胞应具备下列条件: 1.安全宿