第8章 微生物遗传-jdhPPT.ppt

诱变剂的共性原则： 超过95%的致癌物质对微生物有诱变作用；90%以上的非致癌物质对微生物没有诱变作用。 化学药剂对细菌的诱变率 与其对动物的致癌性成正比 回复突变(reverse mutation或back mutation)： 突变体失去的野生型性状，可以通过第二次突变得到恢复，这种第二次突变称为回复突变 美国加利福尼亚大学的Bruce Ames教授于1966年发明，因此称为Ames试验 具体操作：检测 鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhmurium) 组氨酸营养缺陷型菌株(his-)的回复突变率 Ames试验 证明Ames试验重要性的应用实例： 国外曾开发了一种降低妇女妊娠反应的药物“反应停”，由于其药效显著，在60-70年代十分流行， 但随后人们就发现畸形儿的出生率明显增高，而且生产畸形儿的妇女大多曾服用“反应停”，后来采用Ames试验发现这种物质的确具有很强的致突变作用，因此这种药物被禁止使用 但如果能在这种药物上市之前就进行Ames试验检测，那么这种大量出生畸形儿的悲剧完全可以避免， 第四节 基因突变及修复 三、诱变剂与致癌物质——Ames试验 （参见 P 222） 由于生物体内、体外可能存在的差异，可在体外加入哺乳动物（如大鼠）微粒体酶系统，使待测物活化，使Ames试验的准确率达80-90%。 第四节 基因突变及修复 有关基因突变及修复的其它内容自学！ 第五节 细菌基因转移和重组 细菌的三种水平基因转移形式 接合 转导 自然转化 （参见 P 224） 接合 (conjugation)： 细胞与细胞的直接接触（由F因子介导） 转导(transduction)： 由噬菌体介导 自然遗传转化(natural genetic transformation)： 游离DNA分子 + 感受态细胞 一、细菌的接合作用(conjugation) 通过细胞与细胞的直接接触而产生的遗传信息的转移和重组过程 1. 实验证据 1946年，Joshua Lederberg 和Edward L.Taturm 细菌的多重营养缺陷型杂交实验 （参见 P 225） 中间平板上长出的原养型菌落是两菌株之间发生了遗传交换和重组所致！ 参见P 225 证实接合过程需要细胞间的直接接触的 “U”型管实验（ Bernard Davis，1950 ） 参见P 225 2. 机制 (大肠杆菌的接合机制) 接合作用是由一种被称为F因子的质粒介导 F因子的分子量通常为5×107，上面有编码细菌产生性菌毛（sex pili）及控制接合过程进行的20多个基因。 含有F因子的细胞：“雄性”菌株（F+），其细胞表面有性菌毛 不含F因子的细胞：“雌性”菌株（F-），细胞表面没有性菌毛 参见P 226 F因子为附加体质粒 既可以脱离染色体在细胞内独立存在，也可插入（整合）到染色体上 F因子的四种细胞形式 a）F-菌株， 不含F因子，没有性菌毛，但可以通过 接合作用接收 F因子而变成雄性菌株（F+）； b）F+菌株， F因子独立存在，细胞表面有性菌毛。 c）Hfr菌株，F因子插入到染色体DNA上，细胞表面有性菌毛。 d）F′菌株，Hfr菌株内的F因子因不正常切割而脱离染色体时，形成游离的但携带一小段染色体基因的F因子，特称为F′因子。 细胞表面同样有性菌毛。 1） F+×F-杂交= F++ F+ 杂交的结果：给体细胞和受体细胞均成为F+细胞 理化因子的处理可将F因子消除而使F+菌株变成F-菌株 F+菌株的F因子向F-细胞转移，但含F因子的宿主细胞的染色体DNA一般不被转移。 （参见P 226） Hfr菌株的F因子插入到染色体DNA上，因此只要发生接合转移过程，就可以把部分甚至全部细菌染色体传递给F-细胞并发生重组，由此而得名为高频重组菌株。 2）Hfr ×F-杂交= Hfr + F-(+DNA) （参见P 227） Hfr菌株仍然保持着F+细胞的特征，具有F性菌毛，并象F+一样与F- 细胞进行接合。所不同的是，当OriT序列被缺刻螺旋酶识别而产生 缺口后，F因子的先导区(leading region)结合着染色体DNA向受体细 胞转移，F因子除先导区以外，其余绝大部分是处于转移染色体的末 端，由于转移过程常被中断，因此F因子不易转入受体细胞中，故 Hfr×F-杂交后的受体细胞(或接合子)大多数仍然是F-。 染色体上越靠近F因子的先导区的基因，进入的机会 就越多，在F-中出现重组子的的时间就越早，频率也高。 F因子不易转入受体细胞中，故Hfr×F-杂交后的受体细胞（或称接合子）大多数仍然是F-。 Hfr ×F-杂交= Hfr + F-(+DNA) 3）F′×F-杂交= F′+ F′