蚯蚓抗菌的提取及其活性检测毕业论文.docVIP

蚯蚓抗菌肽的提取及其活性检测 摘 要：采用的硫酸铵沉淀蚯蚓粗蛋白，来探究蚯蚓蛋白质抗菌活性用磷酸缓冲液处理蚯蚓粗蛋白沉淀来探究pH活性的影响以及采用稀释法测量蚯蚓抗菌肽达到抑菌效果的最高稀释度。研究表明，80%硫酸铵沉淀的蚯蚓粗蛋白提取液的抑菌效果最好pH为中性及近中性更易于蚯蚓抗菌肽保持其活性蚯蚓抗菌肽对G+的抑菌效果比对G-的好。 关键词：蚯蚓;抗菌肽;硫酸铵沉淀;抗菌活性 Abstract：in order to explore the effect of the different concentrations of ammonium sulfate on the antibacterial activity of Earthworms protein.so they were extracted bysaturation degree of ammonium sulfate .And we can explore crude protein，s antimicrobial peptide activity of earthworm with a buffer phosphoric acid solution of different pH, and measure the highest dilution of antimicrobial peptides of earthworm to inhibit the growth of bacterial using dilution. Studies have shown that earthworm，s crude protein extracted buy the 80% ammonium sulfate precipitation has the best inhibitory effect, neutral or nearly neutral pH is better for the activity of the earthworm，s antimicrobial peptides, and its inhibitory effect to G+ is better than G-. Keywords: earthworm; antibacterial peptides; precipitating in ammonium sulfate; antibacterial activity 0引言 蚯蚓是营腐生生活动物，以腐败的有机物为食，生活充满了大量微生物的潮湿环境中却极少得病，这得益于蚯蚓体内独特的抗菌免疫系统[1]。其中体液免疫很发达，这得益于抗菌肽在其中发挥的重要作用。 抗菌肽（Anti-bacterial peptides）是一类对抗外源性病原体致病作用的防御性肽类活性物质，是在诱导的条件下动物免疫防御系统产生的，也是动物免疫防御系统的重要组成部分[2]。随着对抗菌肽研究的深入，人们发现抗菌肽在动植物和微生物中广泛分布，这些小分子量的多肽抗菌谱广，还可以抗真菌，抗病毒，抗肿瘤，且不易产生抗药性[3]。 国外最早的对蚯蚓抗菌肽的研究是从1985年开始的，Vaillier等人通过国凝胶过滤、色谱聚焦、抑菌活性测定，从蚯蚓的体腔液中提取出了3种活性蛋白，它们均表现出较强的抗菌作用，并且具有红细胞凝聚和溶血的性质，分子量分别为20000Da，40000Da，45000Da，等电点分别为4.9，5.75，6.0[4]。国内直到1995年才有对于蚯蚓抗菌肽的研究报道。林少琴等[5]将蚯蚓粗提取物用DEAE-SepharoseFF层析柱分离纯化得到3种蛋白，并且通过对各组分进行的抗肿瘤研究，发现其对H22腹水瘤的抑制作用较明显。 目前，在两栖类动物、昆虫、哺乳动物和甲壳类动物中都可以分离出抗菌肽，在鱼类和线虫中也有一些发现。但与其他动物相比蚯蚓来源广，便于养殖，易于处理，为蚯蚓抗菌肽的广泛使用提供了条件。而且蚯蚓抗菌肽主要存在于体腔液中，含量相对较高。因此利用蚯蚓抗菌肽易于诱导的特性，进行蚯蚓抗菌肽的直接提取利用，例如其作为抗生素饲料添加剂代替品，可以有效地防止病原微生物的侵袭，减少药物的耐受性以及药物在人体和动物体残留的问题。因此蚯蚓抗菌肽的研究不仅可行性强，而且具有广阔的前景。 1材料与方法 11 材料 蚯蚓：野生蚯蚓； 菌种：圣女果洗脱液中分离的菌种 PBS缓冲液：每升Nacl 8g；Kcl 0.2g；Na2HPO4 1.44g；KH2PO4 0.24g，pH=4.5，6.0，7.5，9.0 ，4℃预冷 LB固体培养基：每升胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，Nacl 10g，琼脂粉15g，pH=7.4 LB液体培养基：每升胰蛋白胨10g，酵母提取物5g