第二十一章基因诊断与治疗PPT.ppt

第二十一章 基因诊断 李信民 5372009443@ 遗传学与分子生物学系 第一节 基因诊断的概念 基因诊断 以DNA或RNA为材料的诊断,通过分析其序列或量的改变对疾病作出诊断的技术和方法. 基因诊断的前提 已明确疾病表型与基因的关系 基因诊断的内容 定性和定量分析 基因序列分析 基因突变分析 基因拷贝数分析 基因表达产物分析 外源基因检测 限制性片段长度多态性 指DNA序列上发生一个变异后获得或丢失了一限制酶识别位点,使DNA限制性片段长度发生变化.在人群中形成两种或两种以上的限制性类型. RFLP分析: 利用特定限制性识别位点进行基因分析 二 针对遗传病致病突变的直接诊断 基因缺失或插入的诊断 点突变的诊断 动态突变的诊断 1 基因缺失或插入的诊断 方法 Southern印变法 跨断裂点的PCR(裂口PCR,gap-PCR) Southern印迹检测片段缺失 2 点突变的诊断 前提条件 突变点的确切位置 基因序列已知 主要方法 等位基因特异性寡核苷酸分子杂交 Allele specific oligonucleotide,ASO 反向点杂交 Reverse dot blot,RDB 变性高效液相色谱 Denature high performance liquid chromatography,DHPLC 反向点杂交(RDB) 将针对各种突变和正常序列的ASO探针固定在杂交膜上,而将原来在ASO杂交体系中固定在膜上的PCR产物改为液相进行杂交,这种立法称为反向点杂交. 变性高效液相色谱 利用PCR扩增过程的单链DNA产物可以随机与互补链相结合而形成双链的特性,依据最终产物中是否会出现异源双链来判断待测样品中是否存在点突变. 3 动态突变的诊断 短串联重复(STR) 拷贝数的增加导致某些遗传病发生,称为动态突变. 方法:可用PCR直接扩增技术诊断基于STR的DNA片段长度多态性