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第六章 代谢途径的调控和代谢控制分析 Regulation of metabolic pathway MCA 通过代谢途径调控的研究可以阐明途径中酶的活性被调节的机理乃至在分子水平上被控制的机理，一旦了解了酶的调节特性，就可以利用代谢控制分析的方法推断途径通量的总体控制，并根据总体通量控制的特点进行网络的优化和菌种的改进。 Enzyme kinetics Regulation of enzyme activity Regulation of enzyme concentration Global regulation Metabolic Control Analysis 代谢途径的调控 细胞内代谢途径的调控主要是通过调节参与生化反应的各种物质的浓度来实现的，包括： 酶的浓度（转录和翻译） 底物的浓度（分解代谢物阻遏等） 产物的浓度（终产物反馈抑制和阻遏） 调节物分子的浓度（抑制或激活） 代谢途径调控的层次性 米氏方程的推导 快速平衡假设 Substrate inhibition enzyme kinetics 变构酶（allosteric enzyme)的特点 协同效应 Cooperativity 分支代谢途径中的反馈抑制或激活模式 同工酶反馈抑制 累积反馈抑制 顺序反馈抑制 协同反馈抑制 增效反馈抑制 激活和抑制的联合作用 分支代谢途径反馈调节实例 分支代谢途径反馈调节实例 酶浓度的调节 酶浓度的调节 ——转录的控制 负调控 ——底物诱导 负调控 ——底物诱导 正调控——Positive regulation of the lac operon 正调控 ——Positive regulation of the lac operon 负调控 ——终产物阻遏 负调控 ——终产物阻遏 代谢网络的调控 转录的控制 正调控 负调控（底物诱导和终产物阻遏） 弱化机制 翻译的控制 反义mRNA mRNA稳定性 翻译起始概率 翻译速率 等… 顺式作用元件：对基因表达有调节活性的DNA序列，其活性只影响与其同处于一个DNA分子上的基因，这种序列不编码蛋白质，多位于基因旁侧或内含子中，如：操纵基因、启动子和终止子。 反式作用因子：游离基因产物扩散至目标场所的过程称为反式作用，反式作用因子的编码基因与其识别或结合位点的靶DNA序列可不在同一个DNA分子上，如阻遏物、RNA聚合酶等都属于反式作用因子。 正调控：若调控蛋白有活性（能和顺式作用元件结合），则受调控基因才能表达。 负调控：若调控蛋白失活（不能和顺式作用元件结合），则受调控基因开始表达。 Cell numbers Time Glucose Lactose 二次生长：正调控与负调控的联合作用 葡萄糖比乳糖更迅速地被利用，因此细胞以葡萄糖为碳源时生长比以乳糖为碳源时要快. 以葡萄糖和乳糖同时作为碳源时，细胞出现二次生长现象 葡萄糖被优先利用，被基本耗尽时，细胞开始合成有关利用乳糖的酶（生长停滞期），将乳糖运入胞内后继续生长。 Glucose Lactose Cell numbers sugar concentration Catabolite Repression (also called glucose repression) Lac Operon 诱导物乳糖（或异乳糖）缺乏时，lacI编码的阻遏物具有活性，和操纵基因结合后关闭转录，起负调控作用。 Lac Operon 存在诱导物乳糖（或异乳糖）时，诱导物充当辅阻遏物，和阻遏蛋白结合使其失活，在cAMP-CRP结合在DNA的前提下，转录起始。 Catabolic Activator Protein (CAP) or cyclic AMP Receptor Protein (CRP) 是乳糖操纵子转录的正调节物。 CRP 是一种多效性的正调节物，或总体调节子，可以作用于许多操纵子 活化的CRP 可以和特定的DNA序列结合，并促进RNA聚合酶与启动子的结合 CRP 对细胞内cAMP的浓度水平作出响应，并被cAMP活化 乳糖操纵子的高表达条件之一是：cAMP-CRP和其上游特定的DNA序列相结合 CRP的简介 葡萄糖浓度高时，细胞内cAMP浓度很低，CRP无法被激活，即使阻遏蛋白LacI失活，操纵子也不能高表达 乳糖操纵子的高表达条件之二是：lacI所编码阻遏物的失活而不能和操纵基因结合 葡萄糖浓度低造成cAM