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蓝丰蓝莓快繁过程中初代培养基筛选研究 　　摘 要：蓝莓果具有很高的保健功能，被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一，是目前世界上最重要的小果类果树之一。本实验以蓝丰（Bluecrop）蓝莓果品为试材，以蓝丰蓝莓带芽茎段为外植体，在添加不同生长调节剂的MS和1/2MS培养基上培养，筛选最佳的初代培养基配方。结果表明，蓝丰蓝莓在添加6-BA 2 mg/L和NAA 0.2 mg/L的MS培养基上进行初代培养后外植体启动率最高，达到88.9%，因此，MS + 6-BA 2 mg/L + NAA 0.2 mg/L是最佳的初代培养基配方。 　　关键词：蓝丰蓝莓；快速繁殖；初代培养；培养基筛选 　　蓝莓（Blueberry），又名越桔、蓝浆果，为杜鹃花科越桔属（Vaccinium L.）植物，多年生落叶或常绿灌木或小灌木，具有较高经济价值和开发前景[1]。蓝浆果具有防止脑神经衰老、增强心脏功能、明目及抗癌等独特功效，被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一[2]，其营养价值远高于苹果、葡萄、桔子等水果，是近几年世界发展最为迅速的集营养与保健于一身的第三代果树品种[3,4]。商业栽培的主要品种是北高丛蓝浆果和南高丛蓝浆果，目前北高丛蓝浆果（高灌蓝莓）品种中栽培面积最大的是蓝丰（Blueerop），占高灌蓝莓总面积的35%[5]。我国蓝浆果的引种工作始于20世纪80年代中后期，并引种成功和得到了推广生产[6,7]。目前，全世界有20多个国家和地区开始蓝莓产业化栽培且市场容量较大[8]。常规的种子繁殖和扦插繁殖受生长季节的影响使得繁殖速度较慢，难以满足市场对苗木生长的需要。目前有关蓝丰蓝莓组织培养方面的研究报道较少。鉴于此，本研究以蓝丰蓝莓茎段为外植体，对快繁过程中初代培养基配方进行研究，为蓝丰蓝莓组培工厂化生产提供基础资料。 　　1 材料与方法 　　植物材料选用蓝浆果品种蓝丰（Bluecrop），外植体材料为田间生长的一年生蓝丰蓝莓的半木质化绿枝，取材地点为四川省甘孜州乡城县康蓝农业科技发展有限公司蓝莓种植基地，在9月上旬取材。以田间生长的半木质化枝条为材料，枝条切成1～2 cm的带芽茎段，经1%的洗衣粉和1%消洗灵水中漂洗后，用毛笔刷清洗外植体表面，再用流水冲洗30min，在无菌条件下，用75%酒精消毒30s，再用0.1%升汞（HgCl2）处理6 min，无菌水冲洗3～4次，以备接种[9]。 　　外植体接种选用的基本培养基有MS和1/2MS两种，附加不同浓度6-BA（1mg/L、2mg/L、3 mg/L）和NAA（0.2mg/L、0.5 mg/L），在培养基中添加蔗糖30 g/L，琼脂7 g/L，pH值为5.8～6.0。每种培养基接种30个外植体，3次重复。接种后在温度为(25±2)℃、光照强度为1500～2000Lx、光照12h/黑暗12h条件下培养，培养30 d后统计外植体污染和启动情况。 　　2 结果与分析 　　2.1 不同处理对外植体启动率的影响 　　以带芽的茎段作为外植体接种于添加各种激素的MS和1/2MS的初代培养基中，茎段在培养12 d后腋芽开始萌动，30 d统计时外植体污染率为24.7%，侧芽高度可达到1～3cm。从表1可以看出，蓝丰蓝莓在12种不同配方处理的培养基中培养，培养基配方不同蓝丰蓝莓启动率不同，呈现出的规律为：处理2处理8处理3处理9处理1处理7处理5处理4处理6处理11处理10处理12，处理2与处理8无差异显著性而显著高于其它的处理，所以处理2为最佳的初代培养基配方，即MS+6-BA2 mg/L+NAA 0.2 mg/L。 　　2.2 培养基类型对外植体启动率的影响 　　由图1可以看出，在MS培养基上蓝丰蓝莓的启动率最高达到70%，而在1/2MS培养基上外植体的启动率仅为61%。经方差分析结果表明，MS与1/2MS培养基对蓝丰蓝莓启动率的影响存在显著差异，这说明MS培养基对提高蓝丰蓝莓外植体启动率具有更好的作用。 　　2.3 不同6-BA浓度对外植体启动率的影响 　　从图2可以看出，蓝丰蓝莓在添加1 mg/L、2 mg/L和3 mg/L 6-BA的3种不同培养基上培养，在6-BA 2 mg/L培养基上外植体启动率最高达到72%，而在6-BA 1 mg/L和6-BA 3 mg/L的培养基上外植体的启动率都为61%左右，即随着6-BA浓度的增加，外植体的启动率呈倒“V”型变化，但不同浓度间未达到差异显著水平。 　　2.4 不同NAA浓度对外植体启动率的影响 　　从图3可以看出，蓝丰蓝莓在NAA 0.2 mg/L和NAA 0.5 mg/L两种不同NAA浓度培养基上培养，在NAA 0.2 mg/L的培养基上外植体的启动率最高达到78%，NAA 0.5 mg/L培养基上外植体的启动率仅为56%，且两者之间达到了显著差异，