γ—氨基丁酸在小儿难治性癫痫患者脑组织中表达及临床意义.docVIP

γ—氨基丁酸在小儿难治性癫痫患者脑组织中表达及临床意义 　　【摘要】 目的：观察γ-氨基丁酸（γ-amino butyric acid，GABA）在难治性癫痫患儿脑组织中的表达，探索其在难治性癫痫发病机制中的作用。方法：15例患儿均来自福建医科大学附属医院南京军区福州总医院神经外科癫痫研究治疗中心，经PET/CT、MRI 和VEEG及临床症候学评估等综合定位方法，确定致痫灶并行功能神经外科学手术治疗（实验组）和3例无癫痫病史的手术患儿（脑肿瘤2例，脑血肿1例）（对照组） 脑组织。采用免疫组化的方法（pv-9000）标记两组标本中γ-氨基丁酸（ GABA）能神经元 ，于光镜（×200）下计数 ，对两组 GABA 能神经元个数进行比较 ，同时观察实验组颞叶皮层光镜（×100 ，×200）下其他病理组织学改变。结果：实验组与对照组比较，表达水平下降，差异具有统计学意义（ P 　　【关键词】 γ-氨基丁酸； 癫痫； 免疫组织化学 　　Expression and Clinic Meaning of γ-GABA in Brain of Child-Patients with Intractable Epilepsy/MA Qian，XIA Gui-zhi，REN Rong-na，et al.// Medical Innovation of China，2013，10（15）：001-005 　　【Abstract】 Objective：To study the expression of γ-GABA in the brain tissue of intractable epilepsy patient and its possible role in the process of leading diease.Method：15 child-patients come from the centre of Epilepsy of Clinical Medical College of Fuzhou General Hospital，Fujian Medical University.Immunohistochemistry was used to detect the expression of γ-GABA in the surgically removed brain tissue of patients with intractable epilepsy（n=15） ， and the results were compared with that of control tissue （n=3）.Result：γ-GABA expressions significantly decreased in the expression of brain tissue γ- aminobutyric acid had been decreased in the treatment of intractable epilepsy in children when compared to those in controls in the same regions （ P 　　1.2 研究方法 实验组和对照组术中收集病灶脑组织标本，标本收集后置于10%多聚甲醛溶液中固定 24～48 h ，随后常规石蜡包埋，切片 ，常温保存备用。标本用病理科专用的石蜡切片机行冠状面连续切片 ，切片厚度为 3 μm，每个标本分别切取10张切片，然后，将全部切片排序 ，每个标本随机抽取2张切片，分别行HE染色和免疫组织化学染色。免疫组织化学染色方法采用pv-9000法（二步法免疫组化检测试剂），切片用二甲苯脱蜡水化 ，然后用乙醇去除二甲苯，放入 0.3%过氧化氢溶液中室温条件下孵育 20 min，用以阻断内源性过氧化物酶的活性，提高抗原的活性。高温高压抗原热修复后，0.01 mol/L PBS溶液 （pH值 7.2～7.4）反复冲洗，然后加入 10 %正常山羊血清置 37 ℃恒温水浴箱封闭抗原 2 h ，甩去多余液体，不冲洗，滴加Ⅰ抗小鼠抗人GAD67单克隆抗体 1∶500，购于北京博奥森公司，置于37 ℃室温下孵育1 h；PBS清洗3次，每次3 min。后续操作步骤严格按PV-9000 采用免疫组织化学试剂盒说明书要求（购买于北京中杉金桥生物公司），滴加试剂1Polymer Helper（即用型）， 置于37 ℃室温下孵育20 min，PBS清洗3次，每次3 min，滴加试剂2（polyperoxidase-anti-mouse/rabbitlgG（即用型），置于37 ℃室温下孵育30 min，PBS清洗3次，每次3 min，暗室中 DAB 显色 （