基因与人类疾病PPT-教育部全国中小学教师继续教育网.PPT

　基因失活（gene inactivation）：利用反义技术能特异地封闭基因表达特性，抑制一些有害基因的表达，已达到治疗疾病的目的。如利用反义RNA、核酶或肽核酸等抑制一些癌基因的表达，抑制肿瘤细胞的增殖，诱导肿瘤细胞的分化。用此技术还可封闭肿瘤细胞的耐药基因的表达，增加化疗效果。 　　免疫调节（immune adjustment）：将抗体、抗原或细胞因子的基因导入疾人体内，改变病人免疫状态，达到预防和治疗疾病的目的。如将白细胞介素-2导入肿瘤病人体内，提高病人IL-2的水平，激活体内免疫系统的抗肿瘤活性，达到防治肿瘤复发的目的。 　　其它：增加肿瘤细胞对放疗或化疗的敏感性：采用给予前体药物的方法减少化疗药物对正常细胞的损用力。如向肿瘤细胞中导入单纯疱疹病毒胸苷激酶基因，然后给予病人无毒性GCV药物，由于只有含HSV-TK基因的细胞才能将CGV转化成有毒的药物。因而肿瘤细胞被杀死，而对正常细胞无影响。 一些常见疾病的治疗策略： --隐性遗传病 　--用正常基因置换致病基因而达到完全校正 　　　　　　　--导入正常基因序列以达到暂时性校正 --显性遗传病　 --用正常基因置换致病基因而达到完全校正 　　　　　　　--使有害基因失活而达到暂时性校正　　　　　　　 --在某些情况下可导入正常基因加以校正 --肿瘤 --杀伤肿瘤细胞（如利用自杀基因，激活免疫系统及 保护正常细胞免受化疗药物的损伤等） --使癌基因 失活（反义技术、核酶）或增加抑癌基因的表达 --传染病 --杀伤传染源（免疫法、自杀基因） --使传染源失活（反义技术、核酶、核酸陷井） 其它疾病 --导入药物基因（药物释放）如激素、细胞因子 --失活有害基因产物（反义技术、核酶、核酸陷井） 　　 --杀伤策略如减少特异细胞群 (二)基因治疗的基本程序 （1）目的基因的选择和制备： 　　可用于基因治疗的基因需满足以下几点：在体内仅有少量的表达就可显著改善症状；该基因的过高表达不会对机体造成危害。 　　在确定欲选目的基因后，就要制备目的基因。正向表达的基因可以是cDNA，也可是基因组DNA片段。可用传统的方法获取，也可采用多聚酶链式反应(PCR)等新技术进行体外扩增。部分反义基因也可采用此法获得，但多数情况下采用人工合成的方式制备 （2）基因的转运 　　目前已有多种基因转运的方式，其基本原则是将外源基因运到细胞内。已使用的有病毒载体和非病毒载体两大类。 　　病毒载体：病毒具有一些独特的性质如多数病毒可感染特异的细胞，在细胞内不易降解；RNA病毒能整合到染色体以及基因水平较高等。因此病毒载体是良好的基因转运载体。目前已被用作载体的病毒有逆转录病毒、腺病毒、腺相关的病毒。疱疹病毒和肝炎病毒等。逆转录病毒用作载体时需进行几步改造： 　　A：将天然的野生型RNA前病毒转变成DNA载体，并插入欲转移的相关外源基因。其基本原则是用标记基因和外源基因替代病毒的编码基因，如图所示。 B：制备辅助细胞为载体DNA提供其丧失的功能，如图所示。 C：将载体DNA导入辅助以产生病毒载体。如图 D：病毒载体感染靶细胞，外源基因在细胞内得以表达，如图。 　　非病毒载体：这类载体的发展较快，目前主要是脂质体，一些具有受体功能的载体也呈现出诱人的前景 　　（3）靶细胞的选择 　　理论上讲，无论何种细胞均具有接受外源DNA的能力，目前基因治疗中禁止使用生殖细胞作为靶细胞，而只能使用体细胞，用于转基因的体细胞必须取材方便，含量丰富，容易培养，寿命较长。可选择的细胞有淋巴细胞、造血细胞、上皮细胞、角质细胞、内皮细胞、成纤维细胞、肝细胞、肌肉细胞和肿瘤细胞等。在实际上应用中应具体根据目的条件选择。 　　（4）细胞转染（tansfection） 　　将目的基因导入靶细胞的方法很多，大致可分为物理学方法、化学方法、融合法和病毒感染法四类。病毒法已在本节的“基因的转运”中有基因介绍。目前较多使用的是脂质体法。 （5）外源基因的表达及检测 　　在筛选出转化分子后还需要鉴定转导细胞中外源基因的表达状况。其中包括对目的基因和标记基因表达的鉴定。常用方法有原位杂交，Northrn杂交，NRA打点杂交，免疫组织化学染色等，前几项是检测外源基因转录出的mRNA，后者则是检测外源基因翻译出的蛋白质。流式细胞仪是一种较为客观准确的仪器，可定量分析外源基因的表达状况。 基因治疗的现状与前景 近十年来，世界上已有近400个基因治疗方案开始用于临床，其中美国占了一大半。“人类基因组计