冰蛋品的细菌检验方法.docVIP

冰蛋品的细菌检验方法 　　中华人民共和国商业部部标准 　　SB115-82代替SB3306-66 　　本标准适用于冰蛋品的肠道致病菌大肠菌群及细菌数的检验。 　　1取样方法 　　批的划分以接触蛋液的工具、设备彻底消毒一次时的生产数量为一批。巴氏消毒的冰蛋可按生产量的大小每隔1～4小时奖巴氏消毒器冲洗消毒一次,每两次冲洗之间,按顺序划为2～4批,如发现致病菌时,本批即不合格,前面的批可不受牵连,后面的批予以复验,按复验结果处理。 　　采样数量按生产批号,在装听时流动取样。 　　检验肠道致病菌时,分蛋(冰鸡蛋黄、冰鸡蛋白)及冰鸡全蛋,取样按每250公斤取样一次,量约100克,每500公斤取样二次,合为一个检样；巴氏消毒冰鸡全蛋取样按500公斤取样一次,每1000公斤取样二次,合为一个检样。 　　检验细菌数、大肠菌群时,在每批装听过程前、中、后流动取样,每批合为一个检样。 　　用具 　　a.电钻与钻头； 　　b.玻璃漏斗或铝制漏斗； 　　c.密封式250克敞口玻璃瓶。 　　注：上项用具在使用前应在160～180的温度下干燥消毒2小时。抽样钻头每抽取样品一批后应以75％酒精进行浸泡消毒。 　　方法 　　在生产过程中灌取流动样品的敞口扦样瓶(罐),随该批产品入冷冻室,冷冻完毕后作细菌检验使用。 　　成品钻样时,先将铁听开口处的外部用75％的乙醇进行消毒,而后将盖启开,用电钻由顶至底斜角钻入,徐徐钻出样品,然后抽出电钻,就中取约200克于扦样瓶(罐)中,封实后准备检验。 　　2检验方法 　　肠道致病菌的检验 　　试样制备：将盛冰蛋的样品瓶浸泡冷水中(谨慎小心,勿使水浸入瓶内)使样品融化后取出,充分摇和均匀。 　　增菌培养：以无菌操作,由每瓶样品中采取一个试样,接种于亚硒酸盐煌绿增菌培养基中(此培养基预先置于盛有约30粒3～4毫米直径玻璃珠的灭菌玻璃瓶内)盖紧瓶盖,振荡均匀,使检样与培养基充分溶和,然后放入37定温箱中培养18～24小时。培养基数量及样品数量按表1规定： 　　表1 　　培养基名称接种试样数量培养基数量 　　亚硒酸盐煌绿30克150毫升 　　分离培养:经过增菌后,接种于远藤氏或伊红美蓝培养基一个,及去氧胆酸盐枸橼酸盐或S·S琼脂培养基一个,置37培养箱中,对鉴别培养基培养24小时,对选择性培养基培养48小时,然后观察结果。如无可疑菌落即可做阴性结果的报告,如有可疑菌落则在每个平皿上挑取2～3个菌落接种于三醣铁琼脂斜面培养基上,再于37培养箱中培养18～24小时,然后按表2作初步鉴定。 　　三醣铁琼脂斜面培养基反应与鉴别见表2: 　　表2 　　反应鉴别 　　底层斜面硫化氢非沙门氏菌属及志贺氏菌属 　　(可作为报告的依据) 　　○＋＋＋ 　　○＋＋－ 　　＋＋－ 　　－－＋ 　　－－－ 　　＋－＋可疑为沙门氏菌属 　　○＋－＋ 　　○＋－－ 　　＋°－－可凝为沙门氏菌属及志贺氏菌属 　　＋－－ 　　注:○＋表示产酸产气反应。＋°表示微量产酸产气反应。＋表示产酸或产硫化氢。－表示不产酸不产气,不产硫化氢 　　生化及血清学鉴定。 　　生化试验: 　　三醣铁琼脂斜面培养基属可疑沙门氏菌属的反应者,则可再行接种一套生化试验(也可以先进行血清凝集试验)：属可疑志贺氏菌属的反应者,先进行血清凝集试验,必要时再进行生化试验,其反应如表3。 　　沙门氏菌属生化反应与鉴别见表3: 　　表3项目反应 　　硝酸盐还原 　　尿素不分解 　　靛基质不产生 　　乳糖不发酵 　　甘露醇发酵 　　蔗糖不发酵 　　水杨素不发酵 　　注:醣类发酵阴性反应者,应观察14日始得报告阴性 　　上列各项生化试验应同时进行接种。 　　志贺氏菌属反应与生化鉴别见表4: 　　表4项目甘露醇鼠李糖木胶糖乳糖靛基质 　　菌别 　　志贺氏痢疾杆菌－－--- 　　史氏痢疾杆菌－＋--＋ 　　宋氏痢疾杆菌＋+-＋迟- 　　福氏痢疾杆菌＋－---－＋ 　　注：“＋”为阳性反应,“－”为阴性反应。 　　醣发酵阴性反应者,应观察14日始得报告阴性。 　　血清凝集试验: 　　a.经表3生化试验而符合于沙门氏菌属的特性者,最后则进行血清学鉴定,即以沙门氏菌属多价诊断血清进行玻片凝集试验。 　　b.玻片凝集试验,挑取在三醣铁琼脂斜面培养基中,疑似沙门氏菌落于洁净玻片的血清滴上,充分混合,使成乳液后,视其有无凝集现象,未见凝集发生者,可作阴性结果报告。如凝集细小不易辩别时,可用放大镜或低倍显微镜进行观察,为避免细菌有自凝现象起见,可在玻片另侧另加生理盐水作对照试验。 　　c.如沙门氏菌多价血清有凝集现象者,则报告发现或检出沙门氏菌属,如必要分型者,则再行单价因子血清凝集及鞭毛因子血清凝集以确定其型别。 　　d.在三醣铁琼脂斜面培养基中,疑似志贺氏菌属反应者,以志贺氏多价血清作凝集,凝集阳性时报告发现志贺