银杏叶提取物防治哮喘小鼠气道重塑机制的研究课件.ppt

银杏叶提取物防治哮喘小鼠气道重塑机制的研究 导 师：戚好文 教授 硕士研究生：李 艳 研究背景 哮喘研究现状 哮喘与MMP-9 核因子-KappaB(NF-KB)与MMP-9 NF-KB与血小板活化因子（PAF） 银杏叶提取物与PAF 哮喘研究现状 Huber(1922)在支气管哮喘患者的尸检中,首次描述了哮喘时气道壁、平滑肌明显增厚，即气道重塑。由于单纯用气道炎症不能完全解释支气管哮喘，因此近年来人们再次把气道重塑作为哮喘研究领域的重点。研究表明，平滑肌增厚可引起气道高反应、增加气道阻力。这无疑增加了哮喘的治疗难度。目前，平滑肌增生机制尚不十分清楚，因此如能了解哮喘时平滑肌增生机制，则对临床治疗哮喘大有益处。 MMP-9 MMP-9属于基质金属蛋白酶（MMPs）家族，MMPs是一类依赖金属离子锌、钙，并以细胞外基质和基底膜为水解底物的蛋白酶大家族。MMP-9为明胶酶，其作用底物为Ⅳ、V、Ⅶ、X型胶原、明胶、变性胶原、弹性蛋白等。 MMP-9在肺内的表达 MMP-9和气道重塑 MMP-9与哮喘 NF-KB和MMP-9 NF-KB是一种重要的核转录因子，几乎存在于所有细胞，调节150多种基因的表达，涉及细胞活动的许多领域如：炎症反应、免疫应答、细胞增殖分化、细胞凋亡等 研究证明，MMP-9是NF-κB的靶基因。NF-κB 是 MMPs 的上游调节因子，大量研究证实，细胞外基质金属蛋白酶上存在 NF-κB 的识别位点 PAF和NF-KB 研究证明PAF是NF-κB的有效激活因子，而且PAF主要在NF-κB 激活的早期阶段发挥作用 Heon Seo K等人也发现在黑色素瘤细胞中PAF也是通过NF-KB通路来增加抗凋亡因子的表达 银杏叶提取物Egb和PAF 银杏叶是我国名贵中药银杏的叶，其提取物的有效药用成分主要为总黄酮和银杏内酯，具有多种药理作用 Egb的药理作用有很多方面：清除自由基和抗脂质过氧化；改善心脑缺血和外周血液循环 ；改善血液流变性作用等 银杏内酯B是研究得最广泛的天然PAF受体拮抗剂 Egb在哮喘防治方面的研究有很多 ，但涉及气道重塑防治的研究未见报道 研究目的 研究内容 实验第一部分 一：建立慢性小鼠哮喘重塑模型 气道重塑模型 结果对照组行动敏捷，一般情况未见异常。哮喘组经激发后，出现呼吸急促，口唇紫绀，腹部翕动，易激惹，烦躁不安。地塞米松干预组、银杏叶干预组也出现哮喘组情况，但症状明显减轻。 HE染色 A.对照组小鼠气道无明显增厚、内壁光滑，气道周围无炎性细胞浸润，肺泡壁结构完整 B.哮喘组小鼠气道平滑肌层明显增厚，管壁周围大量炎性细胞浸润，肺泡有明显出血 C.地塞米松干预组小鼠气道增厚明显减轻，管壁周围少量炎性细胞浸润 D.银杏叶干预组气道壁增厚也见减轻，炎性细胞减少 小鼠肺组织MMP-9mRNA表达 左图为4组小鼠肺组织MMP-9 RT-PCR电泳图。泳道1、2、3、4依次为对照组、哮喘组、银杏叶干预组、地塞米松干预组，M为marker。在300bp附近的条带为管家基因GAPDH，在400-500bp之间的条带为MMP-9 mRNA。 各组小鼠肺组织 MMP-9 RT-PCR吸光度比值 哮喘组MMP-9 mRNA表达量高于正常对照组(P0.01) 地塞米松干预组表达量明显低于哮喘组(P0.05)，但仍高于正常组(P0.01) 银杏叶干预组介于哮喘组与地塞米松干预组之间 小鼠肺组织 MMP-9 蛋白表达 MMP-9 免疫组化半定量图像分析结果 讨 论 气道重塑是慢性哮喘的重要病理特征之一，已成为哮喘研究的热点，本试验参照文献成功制备了慢性哮喘小鼠气道重塑模型 讨 论 银杏叶是我国名贵的中药材 Egb具有广泛的药理作用：抗血小板活化因子、清除自由基、抗炎、抗过敏等，广泛运用于治疗其他疾病如动脉粥样硬化，冠心病，高血脂等 目前， Egb治疗哮喘的研究大多与减轻气道炎症，降低气道高反应性，以及抗氧自由基等有关 Egb减轻气道重塑、对抗MMP-9的表达方面却未见报道 讨 论 本试验中，哮喘组MMP-9基因和蛋白表达量均较对照组有显著增强，与哮喘组相比，银杏叶处理组小鼠气道壁厚度明显减轻，炎症反应也减轻，MMP-9 mRNA 也明显减少，且其蛋白表达量也减少，提示MMP-9 在哮喘气道重塑中有重要作用 本试验中，用银杏叶提取物干预后，MMP-9表达较哮喘组明显减轻，提示银杏叶提取物可能有类似激素的作用，能下调MMP-9，干预ECM重塑从而干预气道重塑 本试验发现银杏叶提取物抑制PAF的表达后，MMP-