发酵工程 第三章 菌种选育与培养.pptVIP

第三章 菌种选育与培养 第一节 重要工业微生物的分离及菌种要求 第二节 工业微生物菌种的选育 第三节 工业微生物菌种的衰退、复壮与保藏 第四节 种子的扩大培养 第一节 重要工业微生物的分离及菌种要求 微生物资源非常丰富，广泛分布于土壤、水和空气中，尤以土壤中最多。 有的微生物从自然界中分离出来就能被利用，有的需要对分离到的野生菌株进行人工诱变，得到突变株才能被利用。 当前发酵工业所用的菌种总趋势是从野生菌转向变异菌，自然选育转向代谢育种，从诱发基因突变转向基因重组的定向育种。 由于生物工业本身的发展以及遗传工程的介入，藻类、病毒等也正在逐步变为工业生产用的微生物。 一、工业生产常用的微生物 细菌（bacteria） 酵母菌（yeast） 霉菌（mould） 放线菌（actinomycetes） 担子菌（basidiomycetes） 藻类（algae） 二、微生物工业对菌种的要求 原料廉价、生产迅速、目的产物产量高。 易于控制培养条件，酶活性高，发酵周期较短。 抗杂菌和噬菌体的能力强。 菌种遗传性能稳定，不易变异和退化，不产生任何有害的生物活性物质和毒素，保证安全生产。 三、重要工业微生物的分离 定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培养条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 分离：利用分离技术得到纯种。 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。 A 采样对象 以采集土壤为主。一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主，富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。 B 采样季节 以温度适中，雨量不多的秋初为好。 在选好适当地点后，用小萨子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回，以便及时分离。 2、增殖培养 为了容易分离到所需的菌种，让无关的微生物至少是在数量上不要增加，可以通过配制选择性培养基，选择一定的培养条件来控制。 例如碳源利用的控制，可选定糖，淀粉、纤维素，或者石油等，以其中的一种为唯一碳源，那么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常生长，而其它微生物就可能死亡或淘汰。这样对下阶段的纯种分离就会顺利得多。 （1）施加选择压力的分离方法 富集液体培养 富集培养是指能增加混合菌群中所需菌株的数量的一种技术。方法的要领是给混合菌群提供一些有利于所需菌株生长或不利于其他菌株生长的条件。例如，供给特殊的基质或加入某些抑制剂。 固体培养基的使用 该方法常用于分离某些酶产生菌，其选择培养基中常含有该酶的作用底物。 （2）随机分离方法 抗生素产生菌的筛选 抗生素可作为分离步骤中的选择压力 生长因子产生菌的筛选 生长因子如氨基酸和核苷酸等的生产不能作为分离步骤中的选择压力，可用随机办法分离产生菌，并通过随后的筛选试验检验出产生菌。 多糖产生菌的筛选 可从菌落的粘稠外观识别这类产生菌。 尽管通过增殖培养效果显著，但还是处于微生物的混杂生长状态。因此还必须分离，纯化。在这一步，增殖培养的选择性控制条件还应进一步应用，而且控制得细一点。纯种分离的方法有划线分离法、稀释分离法。 4、筛选 采用与生产相近的培养基和培养条件，通过三角瓶的容量进行小型发酵试验，以求得到适合于工业生产用菌种。 5、毒性试验 自然界的一些微生物是在一定条件下产毒的，将其作为生产菌种应当十分当心，尤其与食品工业有关的菌种，更应慎重。据有的国家规定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性试验外，其他微生物作为食用，均需通过两年以上的毒性试验。 第二节 工业微生物菌种的选育 用发酵法生产产品，首先要有一个良好的菌种，因此必须进行菌种选育工作 菌种选育工作大幅度提高了微生物发酵的产量，促进了微生物发酵工业的迅速发展 通过菌种选育，抗生素、氨基酸、维生素、药用酶等产物的发酵产量提高了几十倍、几百倍、甚至几千倍 菌种选育在提高产品质量、增加品种、改善工艺条件和产生菌的遗传学研究等方面也发挥了重大作用 菌种选育的目的是改良菌种的特性，使其符合工业生产的要求 （2）菌丝过滤法 真菌和放线菌等丝状菌的野生型孢子在基本培养基中能萌发长成菌丝，而营养缺陷