免疫学实验课件实验二 细菌接种.pptVIP

细菌接种法 步骤和方法 接种工具 常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等。 2.接种环境 接种罩 超净工作台 无菌室 2.连续划线法 1.分区划线法 1、琼脂斜面接种法 菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物； 培养基：斜面固体培养基； 用途：扩增细菌、保存菌种；或用于观察其某些生化特性。 2、液体接种法 菌种：葡萄球菌或大肠埃希菌、枯草杆菌等普通琼脂培养物； 培养基：液体培养基； 接种方法：液体接种法。 从斜面菌种接入液体培养液；从液体培养液接入液体培养液； 用途：扩增细菌，用于观察细菌的生长特性或测定其生化特性。 细菌在液体培养基中的生长现象 混浊：大多数细菌 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜：多见于需氧菌 3、半固体穿种接种法 菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物； 培养基：半固体培养基 接种方法：穿刺接种法。用接种针垂直地穿入培养基中心至底部；然后沿着原接种线将针拔出。 用途：检验细菌的运动性或观察细菌的生化反应。 4）半固体穿刺接种法：可用于保菌或观察动力 细菌在半固体培养基中的生长现象 有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。 四、细菌培养法 一般培养（需氧培养）： ★培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h 二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等 细菌在固体培养基中的生长现象 菌落： 定义：指单个细菌在平板培养基上37℃18-24h的生长繁殖，形成单一的肉眼可见的细菌集团。 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。 菌落与菌苔 细菌在固体培养基中的生长现象 菌落 ★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。 菌 落 培养基的成分和作用 培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。 (1) 营养物质：蛋白胨(氮源)、肉浸液（氮源和碳源）、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类 (2) 水 (3) 凝固剂：琼脂、明胶 (4) 抑制剂：非生长必需，而是选择、鉴定及判断结果的需要 (5) 指示剂：便于观察细菌 培养基的种类（按用途分类） 基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板 营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板 鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（KIA） 选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如SS平板 增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤。 厌氧培养基：用于培养厌氧菌 培养基的种类（按物理性状分类） 液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。 半固体培养基：含0.3％～0.5％琼脂，用于观察细菌的动力。 固体培养基：含2％～2.5％琼脂，多用于细菌的分离培养。 培养基的制备 玻璃器皿的消毒灭菌 制备的程序 调配 溶化 矫正pH 过滤澄清 分装 灭菌 鉴定 保存 * * 原理： 用接种环（针）沾取细菌或标本，通过划线涂抹等方法，将细菌接种到合适的培养基上，并在一定的条件下使细菌得以生长繁殖。 接种环（针）灭菌→俟冷→沾取细菌或标本→进行接种→环灭菌 1. 接种工具 图－6 3.接种方法 根据待检标本性质、培养目的和所用培养基的性质采用不同的接种方法。 1） 平板划线分离培养法：使标本混杂的多种细菌分散成单个细菌。 *连续划线分离法 *分区划线分离法 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环 平板分区划线分离法 菌落 平板分区划线分离混杂菌 琼脂斜面培养基接种法 2）斜面接种法： 主要用于纯种移植，以进一步鉴定或保存菌种 菌苔 3）液体接种法：可观察到细菌不同的生长现象 菌落的形态特征有助于细菌的鉴别 菌落（S型） 菌苔 菌落（R型） *