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“叶绿体中色素提取和分离”实验优化 　　实验是生物学教学必不可少的重要环节。但是在实验教学过程中，常常发现照搬教材的实验步骤往往无法达到预期的实验结果，无法用有力的实验结果说服学生，无法让实验成为帮助学生理解知识的“利器”，反而成为挫败感产生的根源。这违背了设计、安排实验的初衷。优化实验能让学生在生物学概念、规律、原理的指引下，运用科学的研究方法，通过思考、探究、制作、考察、体验等一系列学习活动，获得正确的实验结果与结论，让学生体验学习的成功感，享受实验、热爱学习，促进学生更好地理解和应用基础知识、提高实验能力、形成实事求是的科学态度。 　　笔者以“叶绿体中色素的提取和分离”为例，探讨优化生物实验教学的一些方法和体会。 　　一、教材实验值得商榷之处 　　1.实验材料的选择 　　人教版教材使用的实验材料为菠菜，菠菜一般具有季节性，且含水量较高，提取时容易稀释提取液，造成提取效果不好，所以使用菠菜进行实验，学生往往分离不出教材所说的四个漂亮的色素带，即使有少数学生分离出四个条带，但不清晰。 　　2.制备滤纸条 　　人教版教材没有明确规定所使用滤纸条的规格，在滤纸条一端1cm处用铅笔画一条细的横线，常常会出现层析液没过滤液细线的现象。 　　3.试剂及其剂量的选择 　　人教版教材选取5g的绿叶，少量的二氧化硅和碳酸钙，加入10ml的无水乙醇，但是研磨困难，且无水乙醇易挥发，往往出现绿叶还未研磨完全，乙醇已经完全挥发，最后的滤液所剩无几。同时由于研磨不充分，色素提取的效果不好，进而造成层析效果不佳。 　　4.划滤液细线 　　人教版教材要求使用毛细吸管吸取少量的滤液，沿着铅笔画出的线均匀地画出一条细线。但是实验过程发现毛细吸管的尖端一旦接触到滤纸很容易晕出一个小圆点，划线过程中极易形成一条粗线，如果划的过快又很容易不齐，用这种方法很难使得滤液细线达到“细、直、齐”的标准。 　　5.层析液的选择 　　人教版教材给出的层析液是由20份在60-90℃下分馏出来的石油醚、2份的丙酮和1份的苯混合制成的。但是由于这样的层析液往往毒性强???且容易挥发，实验要求学生等滤液干后再划几次滤液细线，多数学生会选择用嘴吹干的方式，那么在学生可能就会吸入较多的有害气体而造成伤害。而且这样层析出来的滤纸条带不易保存，在学生提交实验报告中如果附上该条带，待老师批阅时已经难以看到颜色。 　　一、对绿叶中色素的提取和分离实验的优化 　　1.实验材料的选择 　　笔者曾尝试用多种植物的叶片进行该实验：合果芋、假连翘、红花酢浆草、木槿叶、女贞叶、菠菜，发现其中合果芋、假连翘、木槿叶效果都非常好（图1为部分材料实验结果）。实验效果的好坏主要取决于取材的时间和植物本身的颜色：选取的绿叶应为新鲜的、颜色墨绿的、表面没有革质或者蜡质覆盖的为佳。新鲜的、墨绿色的叶片，叶绿素的含量高，提取的效果好。叶片表面没有革质或者蜡质覆盖，可以减少研磨的难度。最好是较软、细的叶片，以便于研磨。建议本实验选用绿色的假连翘叶片：假连翘作为绿化常用树随处可见，且四季长青，取材方便、色素含量高、研磨容易，易成功。但是笔者发现使用合果芋叶片虽然研磨的时候困难，但是其滤液放置一段时间呈黏稠的胶状，划滤液细线不易扩散，容易达到“细、直、齐”的要求。而且合果芋的色素含量非常高，实验结果清晰。因此建议给学生假连翘作为实验材料的同时，教师可以自行制备已研磨充分的合果芋滤液，以便有实验失败或者难以划好滤液细线的学生，可直接使用合果芋滤液。研磨前叶片应剪的细碎些、尽可能的避开主脉。值得注意的是已研磨的滤液保存在棕色的试剂瓶中可以避免色素分解。若条件允许研磨时尽可能避光、速度快，这样效果更好。 　　2.实验试剂的选用 　　研磨时，选取假连翘叶片3g，提取液9ml，分两次加入（先加一部分充分研磨至匀浆状，再加入剩余的提取液）；碳酸钙和石英砂（或者二氧化硅）各四分之一药勺。合果芋叶片研磨时选取3g，提取液12ml，分四次加入（最后一次也是研磨完毕时加入）；碳酸钙和石英砂（或者二氧化硅）各四分之一药勺（最小号的 　　药勺）。 　　尝试用无水乙醇和丙酮作为提取液，无论使用何种材料，丙酮的提取效果都优于无水乙醇，但是考虑丙酮具有一定的毒性，且使用无水乙醇效果与之差距不大，还是建议使用无水乙醇。 　　尝试使用20份在60-90℃下分馏出来的石油醚、2份的丙酮和1份的苯混合液、93汽油、四氯化碳对各个实验材料进行层析；发现93汽油的效果最好且保存色素原色的时间最长，混合层析液的效果较差，考虑混合液使用石油醚、丙酮这样有毒性的化学物质，不建议学生实验使用。可以考虑直接使用汽油或者四氯化碳，这样减少了污染和配制药品的麻烦。若考虑汽油的安全性（易燃），则可以选择四氯化碳作为实验材料。 　　3.制备