生物分离工程反团萃取.ppt

反胶团萃取 反胶束溶液的形成条件和特征 反胶团萃取蛋白质的原理 反胶团萃取的影响因素 反胶团萃取萃取蛋白质的应用 1 反胶束溶液形成的条件和特征 反胶束或逆胶束(reversed micelle)是表面 活性剂分散于连续有机相中自发形成的纳米尺度 的一种聚集体。反胶束溶液是透明的、热力学稳 定的系统。聚集体微观上恰似纳米级大小的微型 水池。这些水池可溶解某些蛋白质,使其与周围 的有机溶剂隔离,从而避免蛋白质的失活。通过 改变操作条件,又可使溶解于水池中的蛋白质转 移到水相中,这样就实现了不同性质蛋白质间的 分离或浓缩。 反胶束形成的必要条件：表面活性剂的浓度必须 高于其临界胶束浓度。 临界胶束浓度 （Critical Micelle Concentration CMC） 表面活性剂在溶液中会从单体（单个离子 或分子）缔合成为胶态聚集物，即形成胶团。溶 液性质发生突变的浓度，也即形成胶团的浓度称 为临界胶束浓度。在非极性溶剂中CMC值的变化 范围是0.1—1.0mM 胶束与反胶束的形成 反胶束的尺寸，即“水池(water pool)”的大小 和形状随表面活性剂—溶剂系统的变化而变化， 同时也受温度、压力、离子强度的影响。 反胶束的形状通常为球形，也有人认为是椭 球形或棒形，其半径一般为10-100nm。可由理论 模型推算，计算公式如下： 、 分别为水的相对分子量和密度；Na为阿 伏伽得罗常数；?au为每个表面活性剂分子在反胶 束表面的面积，与表面活性剂、水相和有机溶剂 的特性有关，对于离子型表面活性剂，在室温下， ?au为0.5~0.7nm2。W0为每个反胶束中水分子与表 面活性剂分子数的比值。 AOT在异辛烷中形成的反胶团直径可用下述经 验式推断： 一般 W0 ? 40， dm ? 12，可容纳一个直径为5~10 nm的蛋白质。当相对分子量大于100~200kD，难 于溶解在反胶团中。 反胶团的含水率W0与反胶团特性的关系： 以AOT为例： W0?6 ~ 8时，反胶团内微水相的水分子受表面活 性剂亲水基团的强烈束缚，表观黏度上升50倍， 疏水性也极高； W0?16，微水相的水与正常的水相近，反胶团内 可形成双电层。 2、反胶束萃取蛋白质的原理 萃取蛋白质原理 蛋白质进入反胶束溶液是一种协同过程。即在宏观两相(有机相和水相)界面间的表面活性剂层，同邻近的蛋白质发生静电作用而变形，接着在两相界面形成了包含有蛋白质的反胶束，此反胶束扩散进入有机相中，从而实现了蛋白质的萃取。 改变水相条件(如pH值和离子种类及其强度等)又可使蛋白质由有机相重新返回水相，实现反萃取过程。 蛋白质进入反胶束溶液的推动力 表面活性剂与蛋白质之间的静电作用和位阻效 应是导致蛋白质进入反胶束的主要推动力。 （1）静电作用力 在反胶束体系中，表面活性剂与蛋白质都是 带电的分子，因此静电相互作用是萃取过程中的 一种重要推动力，静电力的大小与溶液的pH值有 直接关系。 2.位阻效应 许多亲水性物质，如蛋白质、核酸及氨基酸 等，都可以通过溶入反胶束“水池”来达到溶于非 水溶剂中的目的，但是反胶束“水池”的物理性能 （大小、形状等）及其中水的活度受水含量W0的 影响。 对于一个特定的分离体系，存在一个临界含 水量W临，当W0 W临，水含量对萃取率的影响很 小，而当W0? W临，萃取率急剧下降。 对于一个热力学稳定的反胶束体系，W0?40， 反胶束的最大半径Rm=6nm，所以反胶束萃取适 用于相对分子量低于10万的蛋白质分子（r = 5nm）。 （3) 疏水性相互作用 蛋白质的疏水性影响其在反胶团中的溶解形式，因而影响其分配系数。 反胶束萃取蛋白质的动力学 萃取过程：蛋白质从液相主体扩散到界面 在界面形成包容蛋白质的反胶束 含有蛋白质的反胶束在有机相中扩散 离开界面 反萃过程： 含有蛋白质的反胶束从有机相主体 扩散到界面 包容蛋白质的反胶束在界面崩裂 蛋白质从界面扩散到水溶液主体 影响反胶束萃取的主要因素 影响反胶束萃取蛋白质的主要因素 与反胶束相有关的因素 与水相有关的因素 与目标蛋白质有关的因素 与环境有关的因素 表面活性剂的种类