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牛卵巢储运条件探索 　　摘要：试验探讨了不同条件下保存和运输牛卵巢的效果。结果表明，37 ℃、2 h效果最佳；25 ℃、9 h比较实用；而4 ℃保存可以在20 h以上长途运输。 　　关键词：牛；卵巢；储运 　　中图分类号：S814.8；S823 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）21-5253-02 　　The Storage and Transport Conditions of Bovine Ovary 　　LIU Xi-mei，BI Yan-zhen，LI Li，XIAO Hong-wei，HUA Zai-dong，ZHOU Mu-qing，HUA Wen-jun， ZHANG Li-ping 　　（Institute of Animal husbandry and Veterinary， Hubei Academy of Agriculture Sciences/Hubei Key Laboratory of Animal Embryo and Molecular Breeding，Wuhan 430064，China） 　　Abstract： In this study the storage and transport effect of bovine ovary under different conditions were discussed. The results showed that the best storage effect was under 37 ℃ and stored 2 hours. Under 25 ℃ and stored 9 hours was more practical. Stored under 4 ℃， the bovine ovary transported long-distance for more than 20 hours. 　　Key words： cattle； ovary； storage-transportation 　　牛卵巢是一种非常重要的稀缺资源，其储存和运输条件直接影响到后期利用效率。为了减少外部环境变化对牛卵巢后期利用的影响，众多研究者主张抽取新鲜卵巢中的卵母细胞进行体外成熟培养[1，2]。然而，在现实操作中屠宰场与实验室相距甚远，很难保证在极短的时间内将卵巢送到实验室，卵巢采集后如何储存和运输成为体外胚胎研究的第一道关口。为此，本试验从不同角度探索了牛卵巢的储运条件，以期提高对这一资源的利用效率。 　　1 材料与方法 　　1.1 卵巢 　　从武汉市牛屠宰点采集，置于储存液（加双抗的生理盐水）中保存，以等温（采集、保存、运输等过程保持同一温度）保温箱进行储存和运输。 　　1.2 试剂 　　卵母细胞成熟培养液：TCM-199+10%FBS+10 IU/mL PMSG+100 IU/mL双抗，受精卵培养液CRlaa。受精试剂：BO液+10 mg/mL肝素钠等[3]。 　　1.3 卵母细胞采集及培养方法 　　用预热的生理盐水清洗卵巢3次，然后用带20#针头的10 mL一次性注射器抽取直径为3～8 mm的卵泡，抽取液注入39 ℃、50 mL尖底离心管中。用杜氏磷酸缓冲液（DPBS）洗涤2次，在体视显微镜下检卵，将捡取的卵母细胞用DPBS洗涤3次，成熟培养液洗涤3次，移入含有???熟培养液滴的直径35 mm培养皿中。每个液滴50 μL并覆盖石蜡油，每滴放COCs（卵丘-卵母细胞复合体）10～15枚。液滴预先平衡2 h以上。成熟培养条件：100%湿度、39 ℃、CO2培养箱培养22～24 h[4]。 　　1.4 体外受精 　　将体外成熟培养22～24 h的COCs用0.25%的胰酶进行消化处理后，捡取有第一极体的卵母细胞进行受精。精子获能处理：BO液+10 mmol/L咖啡因+10 mg/mL肝素钠。成熟卵子放入浓度为3×106个/mL并且已经获能的体外受精悬浮液滴中，在与成熟培养条件相同的条件下培养5 h，然后用受精卵培养液CRlaa（10～15枚/50 μL）进行体外培养[5]。 　　1.5 试验设计 　　①卵巢采集后，分别在20、25和30 ℃储存液（加双抗的生理盐水）中储运9 h，对比3种温度对牛卵母细胞体外受精胚胎后期发育的影响；②卵巢采集后，对比37 ℃、2 h储运和4 ℃条件下储运对牛卵母细胞体外受精胚胎后期发育的影响。每个试验重复3次以上。 　　1.6 数据处理 　　数据采用χ2检验。 　　2 结果与分析 　　卵巢采集后，在不同温度条件下储运9 h，然后抽取卵母细胞进行体外培养，结果见表1。由表1可见，3种温度条件下卵母细胞的成熟率差别比较明显，以25 ℃条件下的效果最好