血清总补体溶血活性（CH50）测定..pptVIP

血清总补体溶血活性测定（CH50试验）  补体系统按其性质与功能分三类 1补体系统固有成分，共九种，C1-----C9 . 2调节和控制补体系统活化的成分 3补体受体(CR) 一、补体的组成和命名 CR1（CD35）、CR2（CD21） CR3（CD11b/CD18） CR4（CD11c /CD18）等 激活物质 抗原抗体复合物（Ag - Ab）、 聚合IgG、SPA、dDNA 溶血反应的用途 1、测定总补体活性 2、补体结合试验，即利用溶血系统作为指示剂，检测另一个反应系统的抗原或抗体。 补体介导的溶解技术 血清补体总活性测定（CH50试验） 试验方法 1、配制2%绵羊红细胞 (1) 1ml绵羊红细胞+5ml生理盐水→2000rpm*5分钟→重复洗涤三次→ (2)用缓冲液配制成2% (200ulRBC+10ml缓冲液) 2、 1：20稀释血清： 300ul血清+6mlBB液(已稀释) 3、稀释巴比妥缓冲液：4mlBB原液+20ml水，1：5稀释(已稀释) 4、 2u/ml溶血素: 用溶血素1 ml + 2000 ml BB液稀释(已稀释) 50%溶血标准管 5、 取2%SRBC悬液0.25ml加1ml蒸馏水使 SRBC完全溶解，为100%溶血。 再加入1.8%NaCL溶液 1ml校正为等渗溶液，最后加入2%SRBC悬液0.25ml ，即为50%溶血悬液 6、比色 肉眼观察：初步目视比较，找出与标准管相近的两管 比色：在分光光度计上读取OD541值,测定与50%溶血标准管最近的一管为最高有效反应管。 正常人血清中的补体活性及含量相对稳定，在疾病情况下补体水平可能出现波动。因此对补体活性及含量的检测有助于某些疾病的诊断、疗效观察和发病机制研究。 临床意义 1、增高：急性炎症，组织损伤，恶性肿瘤 2、降低 ： 主要见于消耗增加： 急性肾小球肾炎、SLE活动期、类风湿关节炎、急性乙型肝炎、慢性肝炎、自身免疫病活动期等有明显的补体下降。 分解加速或合成不足：严重肝病、肝硬化、营养不良。 严重肝病时，肝坏死，CH50降低，甚至为0，对判断肝受损程度有临床意义 思考题 补体C3降低的临床意义？为什么要选用50%的致敏羊RBC溶血作为试验的终点？ 方法学评价 　　 CH50试验测定经典途径总补体溶血活性，所反应的是补体9种成分的综合水平。 本法敏感性较低，补体的溶血活性除与试验中反应体积有关外，还与反应所用缓冲液的PH、离子强度、钙镁浓度、SRBC数量和反应温度有一定关系故实验时对反应的各个环节应严格控制，统一步骤。 * 补体 (Complement) Jules Bodet (1870-1961), Discoverer of complement 补体----是一组存在于人和脊椎动物血清及组织液中具有酶样活性、不耐热和功能上连续反应的 糖蛋白，是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件。 正常情况下，补体在体内以无活性酶原形式存在，须经激活后才能发挥其功能 固有成份 调控成分 补体受体 C1 ~ C9 （ C1q C1r C1s） B因子，D因子，P因子 CT抑制物（CT INH） C4结合蛋白（C4bp） I因子（C3b INA） H因子（C3b INA促进因子）（?1H） S蛋白 经典途径激活(classical pathway) 膜攻击单位：C5~C9 识别阶段 活化阶段 膜攻击阶段 识别单位：C1q、C1r、C1s 活化单位：C4、C2、C3 Fab段 Fc段 暴露的C1q结合位点 IgG 分 子 结 合 抗 原 前 后 的 构 象 变 化 C1q 结合位点被屏障 结合抗原之前 结合抗原之后 CH1 CH2 IgM CH3区，IgG CH2区 Who are you ? C1 补体攻膜单位 细胞膜表面的C3b5b与C6、C7、C8依次结合形成C5b678复合物。该复和物诱发C9在细胞膜表面共聚，形成膜表面的通道结构MACs，造成胞膜的穿孔损伤。 补体膜攻击单位结构 MACs 造成的细胞膜损伤 C7 C6 C8 C5b C9多聚体 C5b+C6+C7+C8+C9 = MACs 补体参与的溶血反应 　　 溶血反应是指补体参与的抗体致敏红细胞的溶解反应. 参与反应的成分有（1）红细胞；（2）抗红细胞抗体，也称溶血素；（3）补体 补体参与的溶血试验 溶血试验 是将抗红细胞的抗体(通常称为溶血素)与相应的红细胞混合，当补体存在时