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烟草正反交组合F1 SRAP比较分析 　　【摘 要】 本文旨在利用SRAP 标记对4X4完成双列杂交烟草组合进行差异比较，从遗传层面鉴定正反交差异。100对SRAP引物组合中只有me3-em2、me4-em6、me6-em5、me10-em7引物组合能4 X 4个组合中扩增出差异条带，但是没能在正反交F1之间扩增出特异条带。表明SRAP标记在鉴别种内之间的差异时效率不高。 　　【关键词】 烤烟 SRAP分子标记 差异 　　【Abstract】 SRAP was used to compare differences of 4x4 Flue-cured Tobacco combinations by diallel crosses excluding reciprocal and identify reciprocal differences of Heredity. Amplified bands were only detected by me3-em2 prime pair、me4-em6 primer pair、me6-em5 primer pair and me10-em7 primer pair in the 100 primer pairs of 4x4 Flue-cured Tobacco combinations but specific bands were not amplified between Reciprocal Crosses Hybrids F1.The results showed that the efficiency of identification intraspecific differences was not high by SRAP. 　　【Key words】 Flue-cured tobacco SRAP Difference 　　0烟草（Nicotiana tabacum L.）为茄科烟属一年生或多年生作物，为典型的自交作物，是最早应用于分子生物学和基因工程研究的模式植物之一。但我国烟草种植品种单一化，严重阻碍了烟草产量和质量的进一步提高。究其原因除烟草育种目标固有复杂性与特殊性以外，主要是烟草育种还依赖于植株的表型选择及一些生理生化指标的测定，未曾从遗传的层面研究应用科学问题，使烟草育种的进展受到一定的限制。近年发展起来的分子标记技术克服了形态性状研究的不足，不受发育时期的影响，结果可靠，因此被广泛使用。而其它作物种，分子标记辅助育种选择体现了它的优势。 　　SRAP（Sequence-Related AmplifiedPolymorphism）标记是Li和Quiros[96，97]在芸苔属植物上开发出的新型分子标记技术，已在马铃薯、水稻、生菜、油菜、大蒜、[98-100]中成功扩增。其原理是利用特定引物对ORFs区域（Open Reading Frames）进行扩增。因不同个体、物种的内含子、启动子及间隔区长度不同而产生多态性。目前，该技术已被用于甜瓜、南瓜、野牛草、辣椒和棉花[101]等的遗传多样性研究，显示了良好的效果和适用性。 　　本文旨在利用SRAP标记对4X4完成双列杂交烟草组合进行差异比较，从遗传层面鉴定正反交差异。从分子水平了解烟草的遗传变异和亲缘关系，为合理选配亲本，挖掘利用现有种质资源提供理论指导；为加快我国烟草育种效率提供理论参考依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　选用材料以红花烟草（Nicotiana tabacum）中的DY87、长脖黄、T61、PVH06共4个烤烟品种为亲本，按Griffing方法I进行4×4完全双列杂交，配制正反、交组合12个，连同亲本共16个（见表1，表2）。 　　1.2 仪器与试剂 　　高速冷冻离心机（日本，Hitachi koki co，ltd），核酸蛋白检测仪（德国，Eppendorf，Biophometer）、紫外凝胶成像系统（GelDoc-1000）、HVE-50高压灭菌锅、电泳槽、移液枪（0.2-2μL、2-20μL、20-200μL、1mL）、超低温冰箱、低温冰箱、Biometra基因扩增仪、电磁炉 　　用于SRAP-PCR反应的Taq酶、dNTP、10×PCR Buffer（Mg2+ 15mM）购自东盛生物公司，标准分子量（Marker）DL100购自GenScript。SRAP引物由上海生物工程公司合成。琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒购自Tiangen公司。 　　1.3 基因组DNA的提取（CTAB法）与浓度测定 　　采集新鲜幼嫩的叶片约2g，放入研钵中，用液N2研磨成粉末，DNA的提取采用CTAB法，参考王关林、王宏建等[102]的方法并稍做改进，提取步骤为：