烟草靶斑病菌毒素对烟草防御酶及丙二醛含量影响.docVIP

烟草靶斑病菌毒素对烟草防御酶及丙二醛含量影响 　　摘要：采用烟草靶斑病菌（Rhizoctonia solani）粗毒素原液处理6叶期烟草幼苗，测定12、24、36、48、60、72 h后烟草叶片中过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）的活性和丙二醛（MDA）含量。结果表明，经烟草靶斑病菌粗毒素处理后的烟草POD、PAL的活性及MDA含量都高于对照，并呈现一定的波动性；PPO和CAT先升高后下降，始终高于对照；而SOD酶的活性表现为持续下降。 　　关键词：烟草靶斑病菌（Rhizoctonia solani）；毒素；烟草；防御酶 　　中图分类号：S432.4.4 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）03-0575-03 　　真菌在侵染寄主植物过程中，毒素是其主要的致病因子之一，可在非常低的浓度范围内干扰植物正常生理功能，破坏细胞超微结构，从而严重影响植物的代谢过程和能量变化，引起一系列的不良反应，导致植物生理失调，最终导致细胞死亡。立枯丝核菌毒素常引起水稻、小麦等农作物发病、萎蔫，甚至死亡[1，2]。烟草靶斑病是中国烟草上的新病害[3]，国内外对其研究相对较少。 　　此次试验利用烟草靶斑病菌（Rhizoctonia solani）产生的粗毒素（以下简称毒素）对烟草防御酶活性及丙二醛（MDA）含量进行了研究，以探明该毒素的作用机理，为进一步研究烟草与立枯丝核菌互作及利用品种抗性育种提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　试验于2010年在沈阳农业大学植物病毒研究室进行，供试烟草品种为NC89。供试烟草靶斑病菌为强致病力菌株YC-9，由沈阳农业大学植物病毒研究室分离保存。 　　1.2 毒素制备 　　粗毒素提取参考Vidhyasekaran等[4]方法进行。将供试菌株于PDA平板上培养3 d，取10块菌饼（直径5 mm）移至100 mL改良Richard培养液中，于25 ℃恒温培养箱中培养15 d，每隔12 h人工振荡1 次。培养液经过纱布和滤纸过滤、离心、活性碳吸附、甲醇洗脱等条件，获得病菌粗毒素。 　　1.3 毒素处理及酶活性测定 　　于烟苗6叶期取新鲜叶片，用无菌水洗净后针刺叶片造成伤口，然后处理组取20 μL浓缩后的粗毒素液接种于伤口上，对照组以空白培养液接种于伤口上，置于28 ℃光照培养箱中培养，分别于接种后12、24、36、48、60、72 h取样。 　　参考高俊凤[5]的方法测定过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）及苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性，MDA含量采用硫代巴比妥酸反应比色法测定。 　　2 结果与分析 　　2.1 毒素对烟草叶片POD活性的影响 　　由图1可以看出，毒素处理烟草叶片后12～24 h POD活性呈下降趋势，但明显高于对照；24～36 h POD活性呈升高趋势；处理36～48 h时再次呈下降趋势；处理60 h时POD活性再次升高并达到最大值，直至处理72 h时仍保持较高的活性。 　　2.2 毒素对烟草叶片PPO活性的影响 　　由图2可以看出，毒素处理烟草叶片后其PPO活性随处理时间的延长先上升后下降，对照则相对平稳。处理12～24 h PPO活性比对照低，呈现缓慢升高的趋势，24 h后PPO活性开始急剧升高，明显高于对照，48 h时达到高峰，此后PPO活性开始下降，至72 h依然高于对照。 　　2.3 毒素对烟草叶片SOD活性的影响 　　由图3可以看出，毒素处理烟草叶片后其SOD活性持续下降，明显低于对照。处理12～24 h时其SOD活性无明显变化，但低于对照，而36 h开始急剧下降，72 h时其SOD活性降至最低，并呈现持续下降的趋势。 　　2.4 毒素对烟草叶片CAT活性的影响 　　由图4可以看出，毒素处理烟草叶片后其CAT活性随处理时间的延长呈现先升高后下降的趋势。12～24 h其CAT活性急剧上升，24 h时酶活达到高峰，明显高于对照，此后CAT活性骤然下降，72 h时低于对照；而对照在此期间呈现小幅度的波动状态，在12～24 h烟草叶片SOD活性呈现缓慢下降趋势，24～36 h缓慢升高，36～48 h开始下降，在48～72 h呈上升趋势。 　　2.5 毒素对烟草叶片PAL活性的影响 　　由图5可以看出，毒素处理烟草叶片后的PAL活性变化较大，在12～72 h出现2个酶活高峰，分别在处理24 h和72 h时，并且毒素处理的PAL活性始终高于对照；而对照PAL活性的变化也呈现波动状态，但变化幅度较小。 　　2.6 毒素对烟草叶片MDA含量的影响 　　由图6可以看出，毒素处理后