蕨菜组织培养消毒方法比较.docVIP

蕨菜组织培养消毒方法比较 　　摘要：以蕨菜[Pteridium aquilinum （L.） Kuhn var. latiusculum（Desv.） Underw. ex Heller]粗壮、幼嫩的茎段为外植体实施组织培养，比较了不同的消毒步骤及洗刷处理对蕨菜茎段的消毒效果。结果表明，用柔软毛笔对蕨菜茎段表面洗刷1 min，再用75%的乙醇浸泡15 s，接着用1.0 g/L的HgCl2溶液处理5 min，取得了组织培养最佳的消毒效果，其污染率为15.0%，成活率达66.7%，是试验范围内效果最佳的消毒方法。 　　关键词：蕨菜[Pteridium aquilinum （L.） Kuhn var. latiusculum（Desv.） Underw. ex Heller]；组织培养；外植体；消毒 　　中图分类号：S647；Q943.1；Q94-336 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）16-3852-04 　　蕨菜[Pteridium aquilinum（L.）Kuhn var. latiusculum（Desv.）Underw. ex Heller]属凤尾蕨科（Pteridaceae）蕨属（Pteridium Gled.ex Scop）多年生草本植物，又名如意菜、龙头菜、拳头菜、猫爪子菜等[1]。作为蔬菜食用，其营养丰富、质脆、味鲜，具有特别的清香味。研究分析表明，蕨菜嫩叶的营养成分齐全且含量高，每100 g可食部分含水分86.0 g、蛋白质1.6 g、脂肪0.4 g、糖类10.0 g、粗纤维1.3 g、钙2.4 mg、磷29.0 mg、铁6.7 mg，尤其是蕨菜内含有17种氨基酸，其中人体必需的赖氨酸（Lysine）、色氨酸（Tryptophane）、苯丙氨酸（Phenylalanine）、蛋氨酸（Methionine）、苏氨酸（Threonine）、异亮氨酸（Isoleucine）、亮氨酸（Leucine）、缬氨酸（Viline）8种氨基酸除色氨酸外都含有一定的比例，它们占了蕨菜氨基酸总含量的39.4%[2，3]。另外，在药理方面，蕨菜的根茎或全草可入药，具有较高的药用价值；从中医药角度来看，蕨菜味甘性寒，具清热化痰、降气润肠、活血化淤、安神利尿之功效，经常食用对软化血管、降低胆固醇含量、预防类风湿性关节炎与心脏病及癌症均有疗效[3，4]。由于蕨菜的高营养、高医疗保健作用和回归自然、无公害等高品质的不断发掘，使其成为都市人渴望“回归自然”的“野味食品”[5，6]。特别是近几年来蕨菜大量地出口日本、韩国、新西兰等发达国家，造成价格持续上升，进而成为山丘地带农民脱贫致富的新门路[7]。现在的蕨菜市场呈供不应求的局面，随之而来的是人们对野生蕨类植物的过度采摘，这严重影响了其资源的可持续利用，导致产量逐年减少[8]。为满足人们对食用蕨菜的需求，对野生蕨菜实行人工繁殖已经刻不容缓。目前在蕨菜种植方面，国内大多采用蕨菜根茎进行无性繁殖，但其繁殖系数低、不便运输；也有采用孢子实施有性繁殖，但因季节的影响使孢子采集不易。上述问题利用植物组织培养方法生产再生植株可以解决[9，10]；但是在植物组织培养实际操作中，以野生蕨菜的茎段作为外植体时出现的污染率很高，并成为组织培养成功与否的关键环节。为此试验采用不同消毒步骤和洗刷方式对蕨菜茎段进行了外植体成活率的影响研究，探索蕨菜外植体的消毒规程，以期为蕨菜人工组织培养快速繁育技术的制订提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　供试材料为蕨菜的幼嫩茎段，采于广西壮族自治区百色市郊外的麒麟山山麓。采集时选择粗壮、第一片叶还未长出的幼茎，取幼茎顶点以下10 cm左右较易折断、无维管丝相连的茎段。 　　试剂有乙醇、HgCl2、KNO3、NH4NO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、Na2-EDTA、FeSO4·7H2O、肌醇、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸；所有试剂都为分析纯。 　　仪器主要是百???学院化学与生命科学系实验室已有的人工气候培养箱、无菌接种工作台、高压灭菌釜、电子天平、手术刀等，以及三角瓶、试管、烧杯、量筒、吸管、试管刷、毛笔等试验器皿及用品。 　　1.2 方法 　　1.2.1 诱导培养基配制 蕨菜组织培养采用的诱导培养基为1/2MS（Murashige and Skoog）培养基+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L，1/2MS培养基的组成为：①大量元素，KNO3 950 mg/L、NH4NO3 825 mg/L、KH2PO4 85 mg/L、MgSO4·7H2O 18